研究目的:“增液荣肠方”是导师李锋教授自拟方剂,临床运用具有荣肠通便之功效,可治疗功能性便秘,也可作为慢性肾功能不全者灌肠之辅助用药,且对结肠黑变病有一定治疗效果。本实验目的在于:1.验证增液荣肠方对便秘大鼠的治疗作用以验证其通腑泄浊之药效;2.探讨增液荣肠方对大鼠结肠AQP2表达的调节效应,研究其通腑机制;3.探讨增液荣肠方对大鼠肾脏AQP2表达的调节效应,探讨其对肾脏的保护作用。研究方法:本实验选取健康雄性SD大鼠60只,体重160-200g,随机选取10只为正常组,其余均为造模组,造模组SD大鼠给予复方地芬诺酯混悬液灌胃造模,连续灌胃8周,在灌胃后30min给予每只大鼠5%墨汁指示剂灌胃,并记录每只大鼠首粒黑便排出时间、粒数及12h大便重量,对大鼠排便时间、粒数及12h大便重量进行统计学分析直至与正常组差异有统计学意义,则模型建立。随后将造模成功的大鼠随机分为5组,分别为模型组,对照组,增液荣肠方低、高、中剂量组,每组选取8只;正常组随机选取8只。共分为6组。正常组给予蒸馏水1ml/(100g·d)BW,1次/d,灌胃;模型组给予生理盐水1ml/(100g·d)BW,1次/d,灌胃;对照组给予麻子仁丸0.536g/(kg·d)BW,1次/d,灌胃;增液荣肠方低剂量组给予增液荣肠方颗粒剂2.24g/(kg·d)BW,1次/d,灌胃;中剂量组给予增液荣肠方颗粒剂4.84g/(kg·d)BW,1次/d,灌胃;高剂量组给予增液荣肠方颗粒剂9.68g/(kg·d)BW,1次/d,灌胃。共灌胃给药4周后,收集大鼠粪便并称重、计算其首粒黑便排出时间、计算其墨汁推进率。用光镜观察各组大鼠结肠及肾脏组织病理变化,并用Western-blot及免疫组织化学方法检测各组大鼠AQP2在肠道及肾脏的表达水平。研究结果:研究结果表明模型组大鼠均出现精神状况差、易激惹、活动少、喜扎堆,被毛脱落,大便干结、排出困难、质硬,进水量减少现象。正常组则状态良好。在给药治疗后,各给药组大鼠精神状态改善,症状明显减轻,进食进水量增加。通过观察各组大鼠粪便情况发现,与模型组相比,对照组、荣肠方低剂量组、中剂量组、高剂量组排便时间明显缩短,排便数量明显增加,墨汁推进率明显提高。通过普通光镜观察大鼠结肠及肾组织变化显示正常组大鼠结肠黏膜上皮细胞排列整齐,黏膜上皮无溃疡、炎症,肌层整齐无变薄,其他各组大鼠结肠黏膜上皮排列均不整齐,高剂量组较接近正常组。模型组可见黏膜上皮细胞排列不整齐,肌层变薄,血管扩张,炎性细胞浸润。与模型组比较,各给药组黏膜上皮细胞逐渐排列整齐,血管扩张减少,炎性细胞减少,增液荣肠方高剂量组较接近正常组。正常组肾脏肾小球大致正常,无增生组织,结构正常,组织中肾小球结构清晰,肾小管结构完整;模型组肾小球红细胞聚集,炎性细胞浸润,肾小球囊腔缩小甚至消失,肾小球基底膜增厚,肾小管管腔水肿;对照组与模型比较肾小球肾小球毛细血管扩张,肾小管水肿不明显。低剂量组与模型组炎性细胞浸润明显,肾小球囊腔不规则;中剂量组与模型组比较肾小球大致正常,囊腔大小正常,炎性浸润减少。高剂量组与模型组比较,肾小球血管扩张不明显,囊腔大小一致,无炎性浸润,肾小管水肿不明显。通过Western-blot及免疫组织化学方法检测可见,模型组大鼠结肠AQP2蛋白显著升高,而正常组、增液荣肠方中剂量组和高剂量组大鼠结肠AQP2蛋白明显降低;与模型组相比,正常组大鼠、增液荣肠方高剂量组肾脏AQP2明显升高,而对照组、低剂量组表达降低。研究结论:1.增液荣肠方可改善便秘大鼠的一般状态,缩短其排便时间,增加大便粒数及重量,且增液荣肠方对大鼠肠道运动具有一定的推进作用。2.增液荣肠方对大鼠结肠中的AQP2表达具有下调作用,且对便秘大鼠结肠病理具有一定的改善作用。进一步验证了增液荣肠方“通腑”的作用,为“通腑泄浊”理论提供了新的理论依据。3.增液荣肠方对大鼠肾脏中的AQP2表达具有上调作用,推测增液荣肠方可通过调节AQPs发挥保护肾脏的作用,从而也为通过调节肾脏AQP2来治疗慢性肾脏疾病及相关疾病提供了新的思路和方药选择。