【摘 要】
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[目的]：构建GRP78靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78, shRNA-GRP78),观察其对人大肠癌RKO细胞系GRP78基因表达及对细胞增殖、转移、凋亡生物学行为的影响。[方法]：使
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[目的]：构建GRP78靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78, shRNA-GRP78),观察其对人大肠癌RKO细胞系GRP78基因表达及对细胞增殖、转移、凋亡生物学行为的影响。[方法]：使用脂质体Lipofectamine 2000将GRP78靶向shRNA质粒表达载体(shRNA-GRP78)转入人大肠癌RKO细胞系内,经G418筛选出稳定转染的阳性细胞。分别通过荧光定量PCR和Western-blotting技术检测RKO细胞系中GRP78在mRNA和蛋白水平上的表达变化,挑选出表达抑制最强的稳定转染细胞系。通过xCELLigence系统检测细胞的增值、迁移能力；流式细胞术检测细胞凋亡变化情况。[结果]：GRP78靶向shRNA质粒表达载体(shRNA-GRP78)可以显著下调GRP78 mRNA及蛋白表达水平(P<0.05); GRP78基因的表达下调显著抑制RKO细胞的体外增殖,并显著增加RKO细胞的凋亡率(P<0.05)；但GRP78基因的表达下调未影响RKO细胞的体外迁移能力。[结论]：GRP78靶向shRNA质粒表达载体(shRNA-GRP78)能明显抑制大肠癌RKO细胞系GRP78 mRNA及蛋白的表达,抑制细胞的生长增殖,诱导细胞凋亡。
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