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蛲虫是实验鼠的重要寄生虫,感染小鼠的蛲虫主要为隐藏管状线虫(Syphacia Obvelata)及四翼无刺线虫(Aspiculuris tetraptera),二者可以混合感染;感染大鼠的蛲虫以鼠管状线虫(Syphacia muris)较为常见。即使在较好的饲养条件下,蛲虫在实验鼠中仍有较高的感染率,据报道在我国开放条件下饲养的鼠群中,蛲虫感染率高达80%。实验鼠是重要的实验动物,被广泛应用于生物学、医学、药学、环境卫生学等各个领域。将感染蛲虫的实验鼠用于科学实验,这不仅干扰了科学实验,影响实验结论的正确性,从而降低科研的科学性、准确性及稳定性,而且还可能威胁研究人员的健康。
第一部分:首次对广东省实验小鼠蛲虫感染情况进行调查。通过剖检来自广东省三大实验动物中心包括BALB/c、KM、C57BL/6j三个种的301只SPF级实验小鼠,收集和保存鼠蛲虫虫体,调查实验鼠蛲虫感染情况。结果发现,广东省实验小鼠蛲虫感染率为32.89%,其中广东省实验动物中心A实验小鼠的蛲虫感染率为75%,实验动物中心B实验小鼠的蛲虫感染率为20.15%,实验动物中心C实验小鼠的蛲虫感染率为0。这表明,广东实验小鼠的蛲虫感染情况比较严重,实验动物的清洁卫生状况在不同的实验动物管理模式下存在差异。
第二部分:运用Parel等(2008)建立的鼠蛲虫特异性PCR鉴定方法,对感染广东实验鼠的蛲虫进行分子生物学鉴定,确定了感染广东实验鼠的蛲虫主要为隐藏管状线虫和鼠管状线虫,其中感染广东实验小鼠的为隐藏管状线虫,感染广东实验大鼠的为鼠管状线虫。
第三部分:本研究选取mtDNA的coxl和nadl基因对感染广东实验鼠的隐藏管状线虫和鼠管状线虫进行遗传变异方面的研究。结果证明了特异PCR方法的准确性,确定了coxl和nadl基因可作为蛲虫分子分类学种群遗传关系的有效遗传标记。研究显示两种鼠蛲虫种内差异在0.0%~1.4%之间,种间差异在19.0%~25.2%之间,种间的差异是明显的。两种鼠蛲虫虫种之间,线粒体coxl基因的差异为19.0‰~19.3%:nadl基因的差异为24.3%~25.2%;其种间序列差异nad1>cox1。通过对线粒体coxl和nadl基因序列的多态性分析,显示这些基因可作为这两种鼠蛲虫的种特异的遗传标记。研究结果表明线粒体nadl基因进化较快,存在的种间遗传标记位点较多,比率较高。通过进化树的分析,感染广东实验鼠的隐藏管状线虫和鼠管状线虫遗传关系较远。
本研究首次对广东省实验小鼠蛲虫感染情况进行了调查,在此基础上运用分子生物学方法对广东实验鼠感染蛲虫进行定种,并选取线粒体基因coxl和nadl基因作为“靶DNA”对广东实验鼠感染蛲虫进行种群遗传关系的研究,这为实验动物管理、动物实验影响因素分析提供了参考依据,同时为蛲虫种类鉴定、分子生物学研究以及蛲虫的防制奠定了基础。