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研究目的:1.通过检测HCC患者外周血中HSP90α的表达水平,分析其表达特点,并与AFP进行比较,探讨HSP90α对HCC的诊断效能。2.检测HCC及肝脏组织中HSP90α的表达水平,分析HSP90α在HCC组织中的表达特点,结合临床病理因素初步分析HSP90α表达水平与其相关性。3.结合HCC患者根治性治疗后的随访信息,初步探讨分析HSP90α在HCC患者预后评估中的价值。4.模拟HCC体内热消融环境,检测高温、低氧下HSP90α在肝癌细胞内、外的表达水平,初步分析高温低氧环境下肝癌细胞内、外HSP90α的变化特点,为HSP90α与HCC热消融后复发机制研究提供理论基础。研究方法:1.收集首发HCC 25例及肝硬化20例患者的外周血,以20例健康者作为对照组,采用酶联免疫吸附实验法检测HCC患者、肝硬化患者、健康人血浆HSP90α及血清AFP的表达水平,分析HSP90α对HCC的诊断效能,并于AFP进行比较。2.选取具有完整病历及随访信息的患者肝组织标本51例,包括首发HCC 30例,正常肝脏组织21例,采用免疫组化法检测正常肝脏组织及不同分化程度的HCC组织中HSP90α的表达水平,分析HSP90α与HCC患者临床病理因素的相关性。3.结合30例HCC患者根治性治疗后的随访信息,比较HSP90α高表达与低表达水平组间无进展生存期的差异。4.高温、低氧刺激肝癌细胞系(HepG2),采用蛋白免疫印迹法检测HepG2细胞及其条件诱导上清液中HSP90α的表达水平。研究结果:1.ELISA结果显示HSP90α在HCC组(139.81±51.98ng/mL)较肝硬化组(89.26±25.66 ng/mL)及健康对照组(51.67±18.53ng/mL)水平明显升高(P<0.001;P<0.001);ROC曲线分析结果显示HSP90α截断值92.17ng/ml,曲线下面积为0.912,敏感性92.0%,特异性82.5%;以AFP正常值上限15ng/ml为本实验AFP截断值,AFP诊断HCC的敏感性56.0%,特异性90.0%。2.IHC结果显示HCC中HSP90α主要定位于肿瘤细胞质,少量定位于细胞核,HSP90α在HCC中的表达水平(平均光密度:0.24±0.31)明显高于肝脏组织(平均光密度:0.17±0.02),差异有统计学意义(P<0.001);结合临床病理因素分析,HSP90α在HCC中的表达水平与肿瘤大小及病理分级相关(P=0.010;P<0.001),肿瘤体积越大,分化程度越低HSP90α表达越高。3.30例HCC患者均接受根治性治疗,其中9例接受热消融治疗,21例接受手术切除治疗,生存分析显示高表达HSP90α的HCC患者无进展生存期明显较短(P=0.006)。4.WB结果显示HSP90α在45℃热应激条件下分泌明显增多,热刺激后6h HSP90α的分泌开始增加,12h时分泌量开始达到高峰,24h细胞培养上清中HSP90α与正常对照组相比明显增多,而细胞内HSP90α表达水平无显著变化;低氧环境下胞外HSP90α分泌相较于正常氧环境下分泌水平有所增加,而45℃热刺激后,HSP90α分泌量明显增多。研究结论:1.HSP90α在HCC患者外周血中表达升高,对HCC有较高的诊断效能,有望协助AFP提高HCC的诊断敏感性,成为HCC新的分子标志物。2.HSP90α在HCC组织中的表达水平与肿瘤大小及分化程度相关,肿瘤体积越大,分化程度越低,HSP90α表达水平越高。3.HCC患者的预后与HSP90α的表达高低相关,高表达HSP90α的患者术后无进展生存期明显缩短,说明HSP90α对HCC进展的监测及预后评估有重要意义。4.高温、低氧环境下肝癌细胞HSP90α分泌水平升高,而胞内HSP90α表达水平变化不明显,实验室条件下45℃是模拟热消融的适合温度,高温可以进一步增加低氧环境下HSP90α的分泌。