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石菖蒲作为临床常用中药,广泛应用于癫痫、痰厥、热病神昏、健忘、中风失语、耳鸣、老年性痴呆等疑难病症,是为数不多的治疗脑病的良药。本课题主要研究石菖蒲对中枢神经系统的作用、作用的物质基础以及作用机理,为进一步开发石菖蒲提供依据。●目的 1.提取石菖蒲的不同部位(挥发油、含油水提液、去油 水煎液),进行体外和体内(脑组织)成分的综合分 析,探索石菖蒲对中枢神经系统作用的物质基础,初 步确定其有效部位。 2.通过石菖蒲对士的宁所致惊厥小鼠的影响实验,观察 石菖蒲不同部位对小鼠的惊厥潜伏期、惊厥次数、惊 厥发生率、死亡时间、死亡率等的影响,探索石菖蒲 对中枢神经系统(CNS)的药理作用。 3.通过石菖蒲对谷氨酸钠所致惊厥小鼠的影响实验,观 察石菖蒲不同部位对小鼠的惊厥持续时间、惊厥发生 率等的影响,进一步确定石菖蒲对CNS的作用。 4.通过石菖蒲对大鼠脑电图的影响实验,观察石菖蒲不 同部位对脑电图的振幅、频率的影响,证实石菖蒲对 CNS的直接作用。 5.通过对动物脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化 脂质(LPO)、一氧化氮(NO)、γ-氨基丁酸(GABA)、 谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)、丙 氨酸(Ala)、牛磷酸(Tau)等指标的测定,探索石菖 蒲不同部位对CNS作用靶点。●方法 1.水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油和去油水煎液部位, 回流法提取含油水煎液部位,并采用气相色谱质谱联 用(GC-MS)的方法,分析测定体外和体内(脑组织) 写宫时时申枢神@皿筑的作用丑机理研玩 成分。 2.采用腹腔注射士的宁(兴奋脊髓)溶液的方法,造成 小鼠惊厥的实验模型,观察石葛蒲不同部位的药效。 3.采用侧脑室注射微量谷氨酸钠(兴奋大脑)溶液的方 法,造成小鼠惊厥的实验模型,进一步观察t1H蒲不 同部位的药效。 4.通过直接针刺电极,单极导联的方法,在生物机能测 定仪卜直接描记大鼠脑电图,考察石葛蒲不同部位的 对脑电图的影响。 5.采用邻苯三酚自氧化法测定SOD、TBA法测定LPO、 硝酸还原酶法测定NO、高效液相色谱柱前衍生法测 定GABA、Gin、ASp、Gly、Ala、Tau等氨基酸类神 经递质,探索石直蒲不同部位对CNS的作用机理。@结果 1 石葛蒲不同部位的化学成分及进入动物脑组织的成 分分析: 1.l石葛蒲不同部位的化学成分分析 GC-MS分析发现,石葛蒲挥发油部位的主要成分为: 顺式甲基异丁香酚、反式甲基异丁香酚、富蒲二烯、 悦香素、p-细辛醚、a-细辛醚。水提液部位的主要 成分为:顺式甲基异丁香酚、反式甲基异丁香酚、p- 细辛醚。去油水煎液部位的主要成分为:卜细辛醚(含 量很低)、有一未鉴定峰(特征成分)。 1.Zfi兽蒲不同部位透过大鼠血脑屏障的成分分析: 透过大鼠血脑屏障的成分有一挥发油部位;榄香素、 p-细辛醚、Q-细辛醚;水提液和去油水煎液部位中均 未检出透过大鼠血脑屏障的成分。实验结果证明石蔓 蒲的一些成分如p-细辛醚等对大脑有直接的作用,因 为血脑屏障是血脑间物质交换的限制系统,药物对中 枢神经系统的直接作用,必须通过血脑屏障,而药物 经口服后,一些未被破坏及未与血浆蛋白结合的非离 二 石宫@对申根神觉皿以的你用及机思研玩 予药物才能透过血脑屏障对CNS产生直接作用。 2 石葛蒲挥发油、水提液能明显延长士的宁所致惊厥小 鼠的惊厥潜伏期,减少惊厥次数,小鼠用药后出现自 发活动减少,有低头、伏卧等行为,表现为中枢镇静 作用;水提液、土油水煎液还能使惊厥小鼠的生存时 问明显延长,且能降低惊厥所致小鼠的死亡率,各组 均个能降低惊厥的发生率,即个能对抗惊厥。 3 石葛蒲挥发油、水提液,去油水煎液均能明显缩短谷 氨酸钠所致小鼠惊厥持续时间,明显降低惊厥的发生 率,表现出中枢镇静和对抗惊厥的作用,本实验结果 提示打拿蒲的挥发油及水溶性部位均存在中枢镇静 作用的有效成分,对兴奋性毒素导致的脑损伤有很好 的保护作用。 4 脑电图实验表明,挥发油及水提液能显著降低大鼠脑