【摘 要】
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本文首次把透明颤菌血红蛋白基因(vgb)引入啤酒酵母As2.346中,用于提高左炔诺孕酮中间体在啤酒酵母As2.346中的转化率。透明颤菌血红蛋白能在分子水平上提高菌体对氧气的利用
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本文首次把透明颤菌血红蛋白基因(vgb)引入啤酒酵母As2.346中,用于提高左炔诺孕酮中间体在啤酒酵母As2.346中的转化率。透明颤菌血红蛋白能在分子水平上提高菌体对氧气的利用能力,增加菌体中的溶氧量。筛选啤酒酵母As2.346敏感的抗性标记,确定甲醛为抗性标记。筛选在啤酒酵母As2.346中稳定存在的质粒类型。经过实验验证,YCp型质粒是在啤酒酵母As2.346中稳定存在的类型。构建了含有vgb基因和甲醛抗性基因的质粒pSPUV129。建立起对啤酒酵母As2.346菌株有效的转化方法——乙酸锂转化法,并将pSPUV129转入啤酒酵母As2.346中。通过PCR特异性扩增和点杂交双重验证表明:获得了含有vgb基因的啤酒酵母As2.346转化子。在发酵实验中,通过对vgb基因转化子和对照菌的菌体浓度和左炔诺孕酮中间体转化率的考察表明:vgb基因在啤酒酵母As2.346中得到了表达。考察48小时之内,vgb基因转化子和对照菌的菌体浓度变化:无论在富氧条件下还是贫氧条件下,vgb基因转化子菌体浓度均高于对照菌菌体浓度。vgb基因转化子左炔诺孕酮中间体转化率比对照菌左炔诺孕酮中间体转化率有显著提高:富氧条件下,对照菌左炔诺孕酮中间体转化率为48.31%,vgb基因转化子左炔诺孕酮中间体转化率为73.67%,提高近1.53倍;贫氧条件下,对照菌左炔诺孕酮中间体转化率几乎为0%,而vgb基因转化子左炔诺孕酮中间体转化率为60.60%。实验结果表明了:vgb基因的转入在分子水平上提高了菌体的溶氧能力,有效地促进了啤酒酵母As2.346的生长,进而提高了左炔诺孕酮中间体转化率。
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