鱿鱼软骨中硫酸软骨素的提取、纯化及降血脂活性的研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 14次 | 上传用户:zooton2009
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鱿鱼是常见的海洋头足类生物,资源十分丰富。我国是捕捞和加工鱿鱼的主要国家之一,在鱿鱼的加工过程中,鱿鱼软骨等加工副产物常被作为下脚料丢弃,未能得到充分利用,造成资源的极大浪费。本文以鱿鱼软骨为研究对象,在单因素试验的基础上对碱提、酶解工艺进行优化,获得最佳提取工艺条件,通过纯化工艺的探讨,制得高纯度的硫酸软骨素,并对其降血脂活性进行了研究,获得了相关实验数据,为今后鱿鱼软骨的综合利用提供了参考依据。本论文主要研究内容如下:1、通过单因素及响应面试验优化料液比、NaOH浓度、浸提温度、浸提时间等影响硫酸软骨素浸出效果的因素条件,依据二次回归模型,确定了最佳浸提工艺条件为料液比1:8(W/V)、NaOH浓度3%、浸提温度50℃、浸提时间5.3 h。经验证,在该条件下硫酸软骨素得率为62.89%,与试验预测值基本吻合。2、在参考文献的基础上,通过预实验确定木瓜蛋白酶为实验用酶,并进行单因素试验,对影响木瓜蛋白酶酶解工艺的几个关键因素进行了考察。在此基础上,采用正交组合设计试验进一步优化,得出影响鱿鱼软骨酶解效果的主要因素依次为:pH、酶解温度和酶解时间;最佳酶解工艺条件为酶添加量2%、pH6.5、酶解温度60℃、酶解时间5 h。在此条件下进行酶解工艺的验证性试验,测得产物中蛋白质含量为4.97%,硫酸软骨素含量为70.11%。3、采用乙醇沉淀法和DEAE-52柱层析法纯化硫酸软骨素。乙醇沉淀法以硫酸软骨素、葡萄糖醛酸含量等两个指标来评价纯化效果,确定了最佳醇沉条件为:NaCl浓度4%、pH6.5、醇沉体系乙醇浓度70%、固形物浓度20%。在此条件下进行验证试验,所得纯化产物中硫酸软骨素含量为91.28%,葡萄糖醛酸含量为41.03%。DEAE-52柱层析法是通过硫酸咔唑法隔管跟踪检测得到洗脱峰,洗脱结果表明分离成分较为单一,分离效果较好。收集洗脱峰,经透析、冷冻干燥后获得硫酸软骨素纯品,所得纯化产物中硫酸软骨素含量为93.16%,葡萄糖醛酸含量为42.73%。对两种纯化方法所制得的硫酸软骨素纯品进行紫外光谱、红外光谱扫描,发现结构中不含(或含微量)核酸、蛋白质,分子中存在乙酰氨基、游离糖醛酸、硫酸根等基团,与硫酸软骨素标准品基本一致。4、利用高胆固醇血症小鼠模型研究鱿鱼软骨硫酸软骨素的降血脂作用,并通过检测部分抗氧化指标,探究抗氧化作用对降血脂功能的影响。结果发现,硫酸软骨素可在一定程度上控制小鼠体重增长,降低小鼠肝脏指数、动脉粥样硬化指数及冠心病指数,同时升高肾脏指数;可有效调节小鼠血清中TC、TG、LDL-C水平,升高血清HDL-C含量,减少肝脏中TC、TG的蓄积量;同时能提升肝脏中脂蛋白酯酶、肝脂酶活性,增强抗氧化酶SOD、GSH-Px的活力。上述结果表明,鱿鱼软骨硫酸软骨素具有一定的降血脂功能,对脂肪肝、动脉粥样硬化、冠心病等疾病具有一定的防治效果。
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