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目的:探讨高尔基体堆叠蛋白65(Golgi reassembly stacking protein65,GRASP65)在体外对人类来源的胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法:首先,通过Western Blot和RT-q RCR鉴别低、中、高分化(MKN-45、SGC-7901、MKN-28)和正常胃黏膜细胞GES-1中GRASP65蛋白质和mRNA的表达量。然后,用特异性siRNA片段和质粒通过Lipofectamine 2000进行瞬时转染,分别下调和上调MKN-45和MKN-28中GRASP65的表达量。用RT-q PCR和Western Blot试验检测转染前后GRASP65的mRNA和蛋白表达量用以证实转染成功。实验分为上调和下调两部分,又各自分为实验组(GRASP65 siRNA组/GRASP65 plasmid组)、阴性对照组(Control siRNA组/Empty vector组)和空白对照组(MKN-45/MKN-28)3组。最后,用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、流式细胞术(FCM)、Transwell迁移和侵袭实验等实验技术检测转染前后各组胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力,以及Western Blot检测转染前后各组细胞GM130、MMP-9和MMP-2的蛋白质表达量。结果:Western Blot和RT-qRCR结果显示MKN-45细胞和SGC-7901细胞中GRASP65的蛋白和mRNA表达量均明显高于MKN-28细胞和GES-1细胞中GRASP65的蛋白和mRNA表达量(P<0.05),故选择MKN-45和MKN-28作为实验对象,分别下调和上调GRASP65的表达量。RT-q PCR和Western Blot结果证明瞬时转染成功,用特异性片段转染过的细胞GRASP65的mRNA和蛋白表达量与另外两个对照组对比有显著差异(P<0.05)。CCK-8、流式细胞术、Transwell迁移和侵袭实验均证明,下调GRASP65的表达量可减弱MKN-45体外增殖、迁移和侵袭,并增强其凋亡;而上调MKN-28中GRASP65的表达量则结果之相反。另外,GM130、MMP-9和MMP-2蛋白表达量随GRASP65表达量的变化而变化。结论:下调GRASP65的表达可显著减弱人类来源胃癌细胞的体外增殖、侵袭和迁移能力,同时促进凋亡,其制可能与GM130的下调有关。