粉防己碱对肺癌细胞株A549的放射敏感性影响及相关机制探讨

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目的:探讨粉防己碱配合X线在体外环境中对肺癌细胞株A549生长、集落形成、细胞周期及相关蛋白表达的影响。方法:本实验以人肺癌细胞株A549为研究对象,以粉防己碱和X射线为处理因素,采用MTT比色实验观察Tet对A549细胞的增殖抑制效应;利用克隆形成实验观察Tet对A549细胞的放射敏感性的影响;细胞流式术检测A549细胞在各种因素处理后细胞周期的分布情况;蛋白印迹试验分析处理因素对细胞周期相关蛋白表达的影响。结果:MTT比色法显示高剂量的Tet对肺癌A549细胞的有明显的抑制作用,低剂量(0.5~3.4μg/ml)的Tet对A549细胞抑制率<10%,可以作为放射增敏的剂量参考;克隆形成实验显示,1μg/ml的Tet配合X射线可以明显降低A549细胞的克隆形成率,放射增敏比(SER)为1.46;细胞流式术发现,X射线可以引起A549细胞G2期阻滞,而低剂量(1μg/ml)的Tet可以减少G2期阻滞,高剂量(10μg/ml)则增加这种阻滞;Western blotting实验显示,在接受4Gy的X射线照射后,A549细胞Cyclin B1蛋白表达水平降低,磷酸化的Cdc2、Cdc25C蛋白表达增高,在加用小剂量Tet后Cyclin B1蛋白表达水平增高,磷酸化的Cdc2、Cdc25C蛋白表达降低,大剂量(10μg/ml)则相反。结论:1.粉防已碱可抑制人肺癌细胞株A549的生长,其抑制效应具有剂量依赖性和时间依赖性。2.小剂量的粉防己碱可增加X射线对人肺癌细胞株A549的杀伤作用,即有放射增敏作用,小剂量的Tet可减少射线诱导的细胞G2期阻滞。3.Tet的对A549细胞的放射增敏作用机制可能与其减少射线诱导的细胞G2期阻滞,减少磷酸化Cdc2和Cdc25C蛋白及增加Cyclin B1蛋白表达有关。
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