本论文中，对两种杀菌剂在葡萄收获前的残留水平进行测定，然后由此得出农药残留动态曲线，并确立收获前残留限量值。同时，利用雅致小克银汉霉生物转化嘧菌胺代谢，并对嘧菌胺的代谢产物进行了分析，最终确定嘧菌胺的代谢机理和代谢途径。　　 首先，对于农药使用后的残留动态研究，通过两种杀菌剂在葡萄生长阶段的农药消解动态进行试验。实验所用的葡萄种植在防雨棚下，以防止雨水对施用后农药的冲刷。实验中所用杀菌剂唑菌胺酯（18.8％，水分散粒剂）和对甲抑菌灵（50％，可湿性粉剂），分别按照韩国推荐浓度(340、1000mg/L)及其倍浓度(680、2000mg/L)，用背负式喷雾器进行喷雾。通过葡萄生长期间的农药残留研究，得出农药的消解动态符合动力学第一方程。以唑菌胺酯为例，施用浓度为340mg/L时，葡萄中残留消解曲线方程为y=5.7072e-0.0413t，其相关系数R2=0.8549，生物半衰期为14天左右;当施药浓度为680mg/kg时，唑菌胺酯的残留消解曲线方程为y=10.9151-0.0506t，R2=0.9195，生物半衰期为18天左右。并确立唑菌胺酯在收获前10天的农药残留最大限量(PHRL10)为2.60mg/kg，收获前5天的PHRL5为2.28mg/kg。如果在收获前某时间点的农药残留量比PHRL5低，那么就预示着作物在此时间5天后可以收获，其农药残留量将比MRL（最大残留限度）低或者相同而符合国家标准。以对甲抑菌灵为例，施用浓度为1000mg/L时残留消解曲线方程为y=1.2268e-0.0212t，其相关系数R2=0.8668，生物半衰期为17天左右，当施药浓度为2000mg/kg时，对甲抑菌灵的残留消解曲线方程为y=2.2155e-0.03291t，R2=0.9014，生物半衰期为33天左右。最终得出对甲抑菌灵在收获前10天的农药残留最大限量（PHRL10）为2.86mg/kg，收获前5天的PHRL5为2.39mg/kg。本实验中，PHRL值是通过高施药浓度的农药残留消解曲线得出来的。如果特定时间的农药残留量低于PHRL值，则能预测葡萄在收获前的农药残留量，确保预期收获期葡萄中农药残留量低于MRL值，对农药的合理，安全使用，起到一定的指导作用。　　 对于农药使用后的代谢研究，本试验利用雅致小克银汉霉生物转化嘧菌胺，并对其代谢机理，途径及代谢产物进行了分析。嘧菌胺是一种能对多种植物病原体起防治作用的杀菌剂。小克银汉酶属具有类似于哺乳动物的细胞色素P450单加酶系统和phaseⅡ药物代谢酶，其中雅致小克银汉霉，作为体外哺乳动物药物代谢模式，被广泛利用于药物代谢产物的毒理学和药理学研究。　　 实验中，雅致小克银汉霉液体培养基在马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)上培养2天。移走上清液后，菌丝体（大约2g）悬浮于新的PDB(55mL)上，添加嘧菌胺(5mg)后，在一定条件下(27℃，170r/min)培养48h，然后对代谢产物进行提取、纯化，代谢产物TMS衍生化后用气相-质谱连仪(GC-MS)进行结构鉴定。实验结果表明，雅致小克银汉霉存在条件下，在12h内大约87％的嘧菌胺代谢，同时生成9种代谢产物(M1-M9)。M1，M2和M4是主要代谢产物，分离提纯后用核磁共振氢谱(1H-NMR)进行分析。实验发现，M1的浓度在6h时达到最大值。M2，比M1有更高的GC-MS响应，这种代谢产物在24h时达到最大值。最初的12h内，只检测到微量M3存在，但其随后慢慢增多。M4在4h后可以观察到，然后在24h后到试验结束前它是量最多代谢产物。　　 M1和M2的TMS衍生物在m/z311处显示出分子离子峰，这个峰比嘧菌胺(M+，223)高88Da(-OTMS)，表明那些代谢产物可能是单羟化的嘧菌胺。M1的1HNMR谱图很好的显示出苯基环(δ7.4-7.7ppm)的质子共振，而炔取代的甲基基团从62.06变到δ4.52，说明这个基团中存在羟甲基。M2的1HNMR谱图中，看出没有发生嘧啶上的化学取代转化，但苯环有新的共振模式。M3和M4的分子离子峰在m/z399可以观察到，说明两个羟基团存在于相关的化合物中。M4显示出M1和M2结合的1H-NMR特点，说明嘧啶环的苯基和炔基支链的羟化，另外M5-M9代谢产物各有m/z313(M5)，315(M6)，403（M7-M8）和491(M9)的分子离子峰。m/z222和/或224的碎片离子峰的存在表明M5和M6的嘧啶环中可能有羟丙烯和羟丙基。在有m/z403的分子离子峰的两种代谢产物中，M7的质谱图与M6很相似，除了88Da分子重量的增加，其表示有额外的羟基团。m/z199的特征碎片离子峰符合（4，6-dimethyl-pyrimidin-2-y(l)）-phenyl-amine。代谢产物M8和M9除了它的分子离子峰，显示出常见的质谱图特点。例如，m/z287的碎片离子峰是最丰富的离子峰之一，其离子峰可能符合(4-methyl-6-trimethylsilyloxymethyl-pyrimidin-2-y(l))phenyl-amine。这些代谢产物被暂定为M6的二或三羟基衍生物。　　 为了研究雅致小克银汉霉生物转化嘧菌胺代谢机理，分别添加细胞色素P450(CYP450)的抑制剂增效醚(pB)和黄素单氧化酶(FMO)的抑制剂甲硫咪唑(MZ)。与空白对照实验嘧菌胺完全代谢相比，PB处理的PDB培养基中，48h后大约30-50％的嘧菌胺代谢。在所有PB(1，10，and100mg/L)处理的培养基中，M3，M4和其它次要代谢产物只有少量存在或者检测不到。实验结果表明PB对嘧菌胺的代谢抑制作用明显。在MZ(1，10mg/L)处理的培养基中，嘧菌胺降解地很快，在48h后检测不到，而初始量的12％仍然停留在高浓度MZ处理的培养基(100mg/L)中。嘧菌胺及其代谢产物在MZ的最低浓度(1mg/L)处理的培养基中的变化状况跟其在空白对照实验培养基中没有区别，说明MZ对嘧菌胺的代谢抑制作用随着MZ浓度的增大而更加明显。　　 实验结果表明，雅致小克银汉霉可以通过PhaseⅠ氧化酶（CYP和FMO）有几个不同的途径有效代谢嘧菌胺。其中FMO可能在嘧菌胺代谢中起着次要的作用，只参与了嘧菌胺代谢的某一特定部分，而CYPs具有广泛的催化活性。在嘧菌胺的生物转化中，丙炔基和苯基部分的羟基化作用是嘧菌胺的主要降解和代谢反应，而嘧啶环上的甲基基团保持稳定。