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背景和目的:近二十年来,高致病禽流感病毒H5N1、H7N9等频繁从禽类跨物种间屏障直接感染人,对人类健康和公共卫生安全构成巨大威胁。令人担忧的是,2013年5月,我国台湾出现全球首例人类感染H6N1亚型流感病毒。虽然H6N1亚型属低致病性病毒,但在禽类普遍存在,有演变成新型流感病毒的风险,也可能成为引发新一轮全球流感的元凶,科研工作者除了提防高致病禽流感病毒H5N1、H7N9,也不能忽视低致病禽流感病毒H6N1的潜在威胁。本文在前期研究基础上,探索水禽源性鸭H6N1亚型禽流感病毒是否具有感染哺乳动物及人类的潜能,进一步筛选优势病毒株,为后期研究其在跨种属传播过程中基因特征提供实验基础。实验方法:1.禽流感病毒的扩增及EID5o实验检测对于前期从市场中分离得到的鸭H6N1亚型及已筛选得到的H9N2亚型共5株禽流感病毒进行鸡胚接种法扩增,扩增后的鸡胚尿囊液离心浓缩成病毒液-80℃低温保存待用。将病毒液梯度稀释做EID50(鸡胚半数感染剂量)实验检测,在动物感染实验前确定病毒接种稀释倍数。2.禽流感病毒感染BABL/c小鼠实验用冻存已确定稀释倍数的5株禽流感病毒模拟病毒传播途径,采用滴鼻、滴眼、滴咽途径接种感染6-8周龄的雌性BABL/c小鼠,定期监测其攻毒后一周内体重变化及排毒情况,并剖杀游离脾脏、肺脏、肾脏、脑、鼻甲等组织,每种组织标本分2份,一份研磨取上清液扩增、HA检测,另一份组织固定,HE染色观察组织病理学变化,免疫组化方法定位检测病毒NP蛋白抗原。3.禽流感病毒体外感染猪肺组织实验快速游离猪肺组织,无菌裁剪为小组织块于6孔培养板中,用梯度稀释的病毒液体外感染猪肺组织,定期采样监测培养上清液及组织研磨液中禽流感病毒HA效价,HE染色观察组织病理学变化,免疫组化方法定位检测病毒NP蛋白抗原。4.禽流感病毒体外感染人肺组织实验收集临床手术中获取的新鲜游离人肺组织,用稀释后的禽流感病毒液进行体外感染,定期采样监测培养上清液及组织研磨液中禽流感病毒HA效价,HE染色观察组织病理学变化,免疫组化方法定位检测病毒NP蛋白抗原。实验结果:1.鸭H6N1亚型禽流感病毒感染小鼠情况:攻毒后小鼠活动度差、进食减少、1.周内体重减轻,组织研磨上清液扩增、HA检测阳性,禽流感病毒抗体阳性,HE染色显示攻毒后小鼠肺组织充血、细胞坏死及炎症反应,免疫组化检测细胞内病毒NP抗原阳性。2.鸭H6N1亚型禽流感病毒体外感染猪肺组织情况:组织研磨上清液扩增、HA检测阳性,HE染色显示病毒感染后肺组织出现局部细胞坏死,免疫组化检测细胞内病毒NP抗原阳性。3.鸭H6N1亚型禽流感病毒体外感染人肺组织情况:组织研磨上清液扩增、HA检测阳性,HE染色显示病毒感染后肺组织出现局部细胞坏死,免疫组化检测细胞内病毒NP抗原阳性。研究结论:1.鸭H6N1亚型禽流感病毒具有跨种属间屏障从水禽直接感染哺乳动物BABL/c小鼠、猪及人肺组织的能力,丰富了流感病毒进化演变及跨种属传播的理论。2.DK/GX/767/2010(H6N1)禽流感病毒株较其他4株禽流感病毒感染致病能力较强,可作为研究鸭H6N1亚型禽流感病毒跨种属传播到人的优势病毒株。