【摘 要】
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蚓激酶是从蚯蚓中提取的一种具有纤溶活性的蛋白,它具有溶解血栓和防止血栓形成的双重药理作用,主要用于治疗和预防血栓性心脑血管疾病。但是在临床应用时,有的患者出现头痛、头晕、恶心等副作用。为了使药物成分单一化,本实验根据本室人工合成的蚓激酶结构基因,及已知的鼠源kappa链序列,设计并合成几对特异性引物,通过重叠延伸PCR和PCR的方法,构建了以鼠源kappa链为信号肽的真核重组表达质粒:pIRESn
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蚓激酶是从蚯蚓中提取的一种具有纤溶活性的蛋白,它具有溶解血栓和防止血栓形成的双重药理作用,主要用于治疗和预防血栓性心脑血管疾病。但是在临床应用时,有的患者出现头痛、头晕、恶心等副作用。为了使药物成分单一化,本实验根据本室人工合成的蚓激酶结构基因,及已知的鼠源kappa链序列,设计并合成几对特异性引物,通过重叠延伸PCR和PCR的方法,构建了以鼠源kappa链为信号肽的真核重组表达质粒:pIRESneo-kappa-LK。并将该重组表达质粒通过脂质体转染BHK-21细胞,经过G418抗性压力筛选,对出现的阳性细胞克隆,通过PCR检测,确定含有kappa信号肽的蚓激酶结构基因在BHK-21细胞基因组中共同整合;通过SDS-PAGE检测表达的目的蛋白的分子量;利用改进的纤维蛋白平板溶圈法（fibrinograose platevassay ,FAPA）,对表达后的蛋白进行体外活性的检测。利用纤维蛋白平板溶圈法,将筛选到的高效表达蚓激酶的阳性克隆细胞株扩大培养,收集上清液,进行凝胶纯化;然后,用纯化后的目的蛋白注射兔的血栓动物模型体内,检测实验动物的血液样品中的纤溶活性及血栓降解产物在溶栓前、后的变化。根据溶栓前、后的血液指标的变化分析表达的蚓激酶蛋白的溶栓效果。
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