里氏木霉(Trichoderma reesei,红褐肉座菌的无性型)是重要的纤维酶和半纤维素酶产生菌。它具有强大的合成蛋白及分泌能力,在工业酶制剂的生产应用广泛。在后基因组时代,蛋白组学逐渐成为研究热点。蛋白质的磷酸化是一种可逆性的翻译后修饰,在细胞的增值、分化、信号转导、转录与翻译调控、蛋白质复合体的形成以及蛋白质降解等方面发挥着极为重要的作用。磷酸化蛋白的鉴定成为翻译后修饰研究的重要内容。为找出具有纤维素酶表达调控功能的磷酸化蛋白,本工作前半部分利用液相色谱串联质谱和非标定量技术,寻找调控里氏木霉分泌纤维素酶的关键磷酸化蛋白,分析调控纤维素分泌的磷酸化蛋白组学的特点。分别在阻遏条件(G,以葡萄糖为碳源)、诱导诱导条件(A,以微晶纤维素为碳源)和中性条件(Y,以甘油为碳源)下培养里氏木霉,提取其胞内总蛋白,进行磷酸化蛋白富集后进行非标记定量分析。分别对比阻遏与正常条件、诱导条件与正常条件、诱导条件与阻遏条件下的磷酸化蛋白的表达情况,发现差异蛋白90种、61种、90种。这些差异蛋白根据功能大致可分为:1:具有锌指结合蛋白活性,2:具有ATP结合蛋白活性,3:具有N-乙酰化转移酶活性,4:具有氧化还原酶的活性等等蛋白功能。这些蛋白主要参与糖酵解,蛋白质的合成,DNA的修复等过程。通过对这些差异磷酸化蛋白功能和参与通路的了解,可为研究如何提高里氏木霉纤维素酶产量提供新的研究思路。尽管目前可通过基因过表达、基因敲除等技术能够提高T.reesei产酶能力,但是对于T.reesei纤维素酶表达的调控过程仍然不够充分。从蛋白质组学层面研究T.reesei,有助于深入认识纤维素表达的过程,提高其纤维素酶的表达效率。本工作的后半部分工作通过二甲基标记定量等手段,对T.reesei-RUTC30在抑制纤维素酶表达和诱导纤维素酶表达条件下的蛋白谱进行分析,并通过比较两个不同条件下的蛋白情况,对显著差异基因进行聚类分析和功能分析,最终选择了GTP结构域蛋白对其进行过表达验证,验证是否对纤维素酶活有影响。通过构建GTP蛋白过表达载体对GTP蛋白进行过表达,发现能够显著地的提高T.reesei纤维素酶酶活力。GTP过表达的重组菌株T.reesei-G9的诱导培养物中滤纸酶活力是出发菌株的1.82倍;而CMC酶活力,是出发菌株的2.73倍。本工作的结果表明,应用非标记定量技术研究T.reesei的磷酸化蛋白组学,寻找差异蛋白,可以为研究T.reesei的细胞生长代谢、表达调控提供新的思路,为进一步提高T.reesei的纤维素酶合成效率提供新的途径。