【摘 要】
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背景:视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)位于视网膜最外层,其主要功能是吞噬视细胞脱落的膜盘等代谢产物、转化和储存维生素A、保护视网膜免受光线和自由基损伤,同时表达分泌多种生长因子和免疫抑制因子、发挥血视网膜屏障作用等。已有研究显示,RPE功能异常是导致年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)发生发
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背景:视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)位于视网膜最外层,其主要功能是吞噬视细胞脱落的膜盘等代谢产物、转化和储存维生素A、保护视网膜免受光线和自由基损伤,同时表达分泌多种生长因子和免疫抑制因子、发挥血视网膜屏障作用等。已有研究显示,RPE功能异常是导致年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)发生发展的首要因素。RPE纤毛作为RPE感触周围环境信息并及时将其传向细胞核的重要细胞器,其变短或者消失将不利于RPE迅速灵敏感知细胞周围信息,并及时做出反应。巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)作为一类多效促炎因子,能促进其他多种炎症因子的表达及分泌,在低氧和应激刺激下能够快速分泌到细胞外,与其特异性受体结合后启动特定的信号通路,调节炎症、细胞增殖、存活和凋亡。本课题组前期研究发现,MIF受体CD74在RPE纤毛根部显著表达,提示MIF对RPE纤毛具有重要调控作用。目的:通过研究RPE纤毛的变化及MIF对RPE细胞纤毛生长的调控作用,为进一步探索AMD的防治方法奠定基础。方法:1.培养正常人的视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19)。2.ELISA法检测人的ARPE-19不同代数(4、7、10)细胞上清液和细胞提取液中MIF的浓度。3.免疫荧光染色法观察不同代数(4、7、10)ARPE-19细胞纤毛长度变化。4.Western blot法检测4、7、10代ARPE-19细胞纤毛蛋白IFT88及IFT57的表达。5.si RNA敲除ARPE-19细胞中MIF基因的表达,免疫荧光染色观察细胞纤毛长度变化、Western blot检测细胞纤毛蛋白IFT88和IFT57的表达变化。结果:1.ARPE-19细胞4、7、10代细胞提取液中的MIF浓度均明显高于细胞上清液(P<0.0001)。2.随着ARPE-19细胞传代次数的增加(第4、7、10代),细胞纤毛长度逐渐缩短(P<0.001)。3.随着ARPE-19细胞传代次数的增加(第4、7、10代),细胞纤毛蛋白IFT88和IFT57的表达逐渐减少(P<0.05)。4.si RNA MIF转染ARPE-19细胞后,MIF-si RNA组细胞纤毛与si RNA NC组及空白对照组相比,细胞纤毛明显变短(P<0.0001),纤毛蛋白IFT88和IFT57的表达显著降低(P<0.001)。结论:MIF在ARPE-19细胞提取液中的浓度明显高于细胞上清液,随着细胞培养代数的增加,ARPE-19细胞纤毛逐渐变短,纤毛蛋白的表达逐渐减少。进一步特异性敲低ARPE-19细胞中MIF基因的表达后,ARPE-19细胞纤毛明显变短,同时纤毛蛋白IFT88和IFT57表达显著减少。本文结果表明MIF与RPE纤毛的生长密切相关,MIF表达减少不利于RPE纤毛生长。
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