论文部分内容阅读
B1、B5是从葡萄果穗附生微生物区系分离获得的2株对葡萄灰霉病菌(Botrytis cinerea)具有很强的拮抗作用的拮抗细菌。经鉴定B5属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.),B1待鉴定。本文测定了B1、B5的抑制作用、发酵条件、抑菌蛋白活性及特性,同时研究了B1、B5与化学农药混配的田间防治效果,得出以下主要结论:1拮抗细菌B1、B5的抑制作用通过对菌株B1、B5抑菌效果、机制和抗真菌谱进行测定,结果表明,B1、B5和葡萄灰霉病菌对峙培养5d后,均产生明显的抑菌带,抑菌带宽度为6.90～9.67 mm,培养10 d后,仍然保持稳定的抑菌效果;B1、B5的发酵原液对葡萄灰霉病菌孢子萌发具有显著的抑制作用,抑制率为97.51%～98.12%;B1、B5对病菌的作用机制表现为使病菌菌丝畸形、原生质浓缩、菌丝断裂、抑制病菌分生孢子的萌发、导致孢子芽管扭曲。对峙培养表明,B1、B5均具有较广的抗真菌谱,对10种供试病原真菌的菌丝生长抑制率都在50%以上。2拮抗细菌B1、B5发酵条件的测定为提高拮抗菌株B1、B5发酵生产的菌量和抑菌活性,对其摇床发酵培养基成分及发酵条件进行研究。结果表明拮抗细菌B1的最佳碳氮源为乳糖和硝酸铵,最适培养条件为:温度28～33℃、培养时间36～48h、起始pH6.0、装液量50ml/250ml;B5菌株的最佳碳氮源为葡萄糖和蛋白胨,最适发酵条件是:温度28～33℃、培养时间36～48h、起始pH7.0、装液量50ml/250ml;3拮抗细菌B1、B5抑菌蛋白活性及其特性研究对B1、B5发酵液分别经70%和80%的(NH4)2SO4盐析得到的蛋白粗提液对葡萄灰霉病菌营养生长的抑制效果最佳,抑菌圈直径为21.5mm、22.4 mm。B1、B5抑菌蛋白对高温较稳定,均在80℃以内处理30 min后其抑菌活性基本不变;B1、B5抑菌蛋白均对蛋白酶K比较稳定;在pH5～10范围内均表现很强的抑菌活性,中性条件下的抑菌效果最佳,碱性条件的抑菌活性强于酸性条件;且B1、B5抑菌蛋白耐储存,在常温下放置30d抑菌活性保持不变。4菌-药结合田间防效测定本试验筛选出0.1mg/ml的多菌灵(25%可湿性粉剂)对拮抗菌B1、B5无抑制作用,并与B1、B5混配有协同增效作用。试验结果表明,B1、B5与0.1mg/ml多菌灵混配对葡萄灰霉病菌室内离体果防治效果分别达到了87.41%和88.50%,大棚温室防治效果也可达80%,其中B5与0.1mg/ml多菌灵混配的防治效果最好,发病率仅为6%,防治效果达81.38%,明显优于单独使用拮抗菌和多菌灵的防效。