[目的]:通过建立大鼠常温、亚低温、选择性深低温体外停循环模型,使大鼠在不同温度下处于缺血缺氧状态,通过使用TRIF通路抑制剂和MyD88通路抑制剂处理后,明确不同温度TLR4介导的MyD88或TRIF信号转导通路是否参与了调节海马区神经元自噬的发生机制。[方法]选用健康的雄性SD大鼠40只,4只SD大鼠作为假手术组,36只SD大鼠每组4只随机分为9组:常温停循环组、亚低温停循环组、深低温停循环组、MIP处理后的常温停循环组、MIP处理后的亚低温停循环组、MIP处理后的深低温停循环组、RV处理后的常温停循环组、RV处理后的亚低温停循环组、RV处理后的深低温停循环组。大鼠体外停循环模型的建立后,假手术组不作降温和停循环处理,循环20分钟;常温组(37℃)体外循环建立后停循环10分钟,亚低温(28℃)体外循环建立后停循环10分钟,深低温组(20℃)体外循环建立后停循环10分钟;MIP组需要向大鼠脑室注射MYD88的抑制剂MIP,RV组需要向大鼠脑室注射TRIF的抑制剂Resveratrol。每个实验组中取3只大鼠停循环后迅速断头取出海马组织,在-81℃冰箱保存,行免疫蛋白分析TLR4、MYD88、TRIF、Beclin1的蛋白表达和实时荧光定量PCR分析TLR4、MYD88、TRIF、Beclin1的mRNA表达;每个实验组中取1只大鼠断头取全脑存放于甲醛中行MYD88、TRIF、Beclin1 免疫荧光检测。[结果]TLR4蛋白表达和实时荧光定量PCR的结果:常温组比假手术组蛋白表达显著增多(P<0.001),亚低温组比常温组蛋白表达明显减少(P<0.05),深低温组比亚低温组蛋白表达明显减少(P<0.05);在常温组、亚低温组和深低温组中,各组中未处理、MIP处理和RV处理之间对比,差异不显著(P>0.05)。TLR4mRNA表达趋势大致与TLR4蛋白表达趋势相同。MYD88蛋白表达和实时荧光定量PCR的结果:常温组比假手术组蛋白表达显著增多(P<0.001),亚低温组比常温组蛋白表达显著减少(P<0.001),深低温组比亚低温组蛋白表达显著减少(P<0.001);在常温组、亚低温组、深低温组中,各组中MIP处理分别与未处理和RV处理比较,蛋白表达显著减少,(P<0.001)。MYD88mRNA表达趋势大致与MYD88蛋白表达趋势相同。TRIF蛋白表达和实时荧光定量PCR的结果:常温组比假手术组蛋白表达显著增多(P<0.001),亚低温组比常温组蛋白表达显著减少(P<0.001),深低温组比亚低温组蛋白表达显著减少(P<0.001);在常温组、亚低温组、深低温组中,各组中RV处理分别与未处理和MIP处理比较,蛋白表达明显减少(P<0.05)。TRIFmRNA表达趋势大致与TRIF蛋白表达趋势相同。Beclin1蛋白表达和实时荧光定量PCR的结果:常温组比假手术组蛋白表达显著增多(P<0.001),亚低温组比常温组蛋白表达显著减少(P<0.001),深低温组比亚低温组蛋白表达显著减少(P<0.001);在常温组、亚低温组、深低温组中,各组中MIP处理分别与未处理和RV处理比较,蛋白表达明显减少,(P<0.05)。Beclin1mRNA表达趋势大致与Beclin1蛋白表达趋势相同。MYD88及Beclin1免疫荧光结果:在假手术组中未见未见绿色荧光,在常温组中绿色荧光相对较多,亚低温组中绿色荧光较常温组减少,深低温组中绿色荧光较亚低温组减少;在常温组、亚低温组、深低温组内比较,MIP处理组较RV处理组和未处理组荧光显色减少。TRIF免疫荧光结果:在假手术组中未见未见绿色荧光,在常温组中绿色荧光相对较多,亚低温组中绿色荧光较常温组减少,深低温组中绿色荧光较亚低温组减少;在常温组、亚低温组、深低温组内比较,RV处理组较MIP处理组和未处理组荧光显色减少。[结论]1.缺血缺氧可诱导大鼠海马组织发生自噬,低温会抑制自噬的发生;在一定程度上,随着温度的降低,可加强对自噬的抑制程度。2.在常温、亚低温、深低温缺血缺氧条件下,大鼠海马组织自噬的诱导通路可能与TLR4\MYD88信号通路有关。