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T细胞是获得性免疫应答的主要效应细胞,协同刺激信号参与了调节T细胞的活化、增殖、效应和凋亡的整个免疫应答过程。协同刺激分子按分子结构可分为TNF/ TNFR和B7/CD28两大超家族。PD-1/PD-L是CD28/B7超家族的新成员,主要介导负性协同刺激信号。近来研究发现:可溶性PD-1(sPD-1)是由T细胞表达的PD-1Δex3剪接异构体产生,参与机体的T细胞免疫功能调节,sPD-1可能是维持PD-1/PDL-1之间平衡的重要因素,以及天然的PD-1信号阻断剂。在自身免疫性疾病时过高水平的sPD-1存在,可特异性阻断PD-1信号通路,导致免疫平衡失调,自身反应性T细胞不能有效抑制或清除,造成免疫病理损伤。但是sPD-1是否参与了病毒感染及其与T细胞异常活化的关系尚待进一步研究。生殖器疱疹(genital herpes,GH)是一种性传播性疾病,是生殖器溃疡的首要病因,主要由??型单纯疱疹病毒(HSV-2)引起,人群中的感染率在世界范围内逐年增加;GH容易复发,称之为复发性生殖器疱疹(Recurrent genital herpes,RGH)。目前,对于GH的复发问题,尚无满意的临床治疗方案,从免疫学角度探讨疱疹病毒感染患者的发病机制及免疫耐受机制十分重要。乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝DNA病毒,HBV侵入成人机体后约有10%感染者可变成慢性感染,称之为慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB),而HBV慢性感染又是导致肝硬化和肝癌的主要因素。慢性乙型肝炎尚无理想的临床治愈方案,其发病机理目前不甚清楚,已发现乙型肝炎的发生、发展及慢性化与宿主免疫功能紊乱尤其是细胞免疫功能异常低下或免疫耐受有密切关系。RGH与CHB同为慢性病毒感染性疾病,都存在着免疫耐受及免疫逃逸现象。本研究对RGH患者和CHB患者血清中的可溶性PD-1进行了检测分析,并与一些临床指标进行比较分析,探讨外周血中sPD-1的异常表达在慢性病毒感染中的作用和临床意义。同时分析了外周血T细胞及其亚群变化和T细胞的异常活化。实验结果显示:⑴采用ELISA检测方法,对88例健康对照组、74例RGH患者和66例CHB患者的血清标本分别进行sPD-1蛋白含量的测定,结果发现健康献血者、RGH患者及CHB患者血清中均存在适量的sPD-1因子表达,而RGH患者和CHB患者sPD-1蛋白量都显著低于健康人生理条件下的表达水平。其中,发作期RGH患者sPD-1蛋白量更低,稳定无症状期RGH患者sPD-1蛋白量亦显著低于健康组,两组RGH患者sPD-1蛋白量相比较有显著性差异。CHB患者血清标本中sPD-1蛋白水平与血清HBV-DNA载量呈负相关。结果表明sPD-1对于调节免疫平衡起十分重要的作用,主要通过调节sPD-1对PD-1/PD-L负性信号的阻断作用,促进T细胞异常活化或异常受抑。RGH患者和CHB患者外周血血清中sPD-1异常低表达,使其对DC等细胞表面PD-Ls的封闭阻抑作用降低,可能使DC等细胞相对高表达PD-L1/PD-L2,导致效应T细胞获得更强的PD-1/PD-L负性调控信号,而PD-L与T细胞膜上PD-1结合,激发PD-1/PD-L途径,引发抑制信号的产生和细胞因子mRNA合成的减少,致使T细胞的活化增殖受抑制,IL-2、IL-10和IFN-γ的分泌也相应的减少,这可能是慢性HSV、HBV逃避机体免疫监视,产生免疫耐受的机制之一;发作期RGH患者sPD-1的含量更低,可能是生殖器疱疹发作期病毒繁殖快、致病性强,而机体免疫力异常低下,表现为PD-1/PD-L负性调控效应更明显;稳定无症状期RGH患者人sPD-1水平亦较低,则可能使HSV逃避机体免疫监视,产生免疫耐受,使机体不能完全清除HSV,最终导致生殖器疱疹反复发作,不易根治;CHB患者外周血sPD-1蛋白含量与血清中HBV-DNA载量呈负相关,提示CHB患者sPD-1的低表达使机体细胞免疫应答能力下降,有利于HBV持续感染、复制而使HBV-DNA载量上升。⑵本研究还对41例急性乙型肝炎患者外周血血清中sPD-1进行检测,结果发现急性乙型肝炎患者外周血血清中sPD-1蛋白含量显着高于健康人水平。急性乙型肝炎患者外周血血清中sPD-1的异常高表达,表明sPD-1对机体有增强免疫力的作用,能够促进T细胞免疫应答,可能是通过阻抑免疫细胞表面PD-L1/PD-L2,促进T细胞激活。⑶本研究还对RGH患者外周血中T细胞亚群进行了检测分析,并与健康献血者相比较。采用免疫荧光标记和流式细胞仪检测术检测了30例复发性生殖器疱疹患者和30例健康献血者,结果显示RGH患者组CD3+细胞百分数、CD4+/CD8+均显著低于健康组,随着病情反复发作,病程延长,细胞免疫功能下降,免疫功能失衡又进一步促使病情反复。T细胞亚群分析显示CD4+T细胞百分率均有下降趋势、而CD8+T细胞百分率有增加趋势,但与健康献血者相比较都无显著性差异,这可能与我们的检测标本量少有关;⑷对RGH患者外周血CD4+ CD28+、CD8+ CD28+T细胞亚群检测结果显示,RGH患者外周血CD4+ CD28+细胞百分数显著低于健康组,而外周血CD4+ CD28-细胞百分数显著高于健康组。CD28分子是经典的协同刺激分子,其所介导的协同刺激信号在初始T细胞接受抗原刺激后的活化过程中发挥了重要功能,并诱导其它协同刺激分子(如ICOS、OX40、CD154)在活化T细胞的表达,使呈诱导表达的协同刺激分子在T细胞不同的活化或分化阶段、不同的微环境中发挥协同刺激信号功能,从而启动T细胞协同刺激信号网络,保证T细胞完全、持续活化。RGH患者外周血CD4+ CD28+的低表达,而CD4+ CD28-高表达表明其在T细胞活化方面存在缺陷。综上所述,本研究显示可溶性协同刺激分子sPD-1和T细胞表面CD28分子的异常表达可能是慢性病毒性传染病发病机制的重要环节,假设在体内有效地控制和调节这一环节,一方面可以有效地控制免疫应答,防止过度免疫病理损伤和重型肝炎的发生;另一方面可以打破机体免疫耐受(复发性生殖器疱疹、慢性乙型肝炎),从而改善机体的免疫状态。若能人为干预机体内PD-L/PD-1信号通路,有效地调节sPD-1的生物学水平促进T细胞的活化和增殖,打破机体的细胞免疫耐受,提高机体的免疫功能,进一步再配合抗病毒药物,将会提高抗病毒药物的疗效,为慢性病毒性传染病的治疗开辟新路。