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猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一种重要的人畜共患病病原体,能引起猪疫病,临床上能引起猪的高热、脑膜炎、败血症、关节炎等,同时对畜牧业从业人员带来了严重的威胁,可以导致人的脑膜炎及中毒性休克综合症等严重疾病。根据其荚膜多糖抗原性的差异,可分为35个血清型(1-34,1/2)。其中2型流行最广、致病性最强且危害最严重。本实验以猪链球菌2型为研究对象,对新发现的可能的毒力因子Omp40和VirB4进行免疫原性研究,为今后亚单位疫苗的研究奠定基础。1猪链球菌2型假定外膜蛋白Omp40及IV分泌系统VirB4蛋白的表达Omp40及VirB4蛋白是根据SS2毒力菌株HA9801与无毒力菌株T15抑制性差减杂交得到的可能的毒力因子,根据已发表的猪链球菌2型(S.suis type2)人源98HAH33株的Omp40及VirB4蛋白的基因序列,分析选择免疫原性较好部分的基因序列设计并合成两对引物,以HA9801株的基因组DNA为模板,通过PCR技术,扩增出蛋白的部分基因并定向克隆至表达载体pET-32a(+)中。重组质粒通过PCR鉴定和测序后,转化入大肠杆菌BL21(DE3),表达出分子量约为52.5kDa、56.4kDa的融合蛋白,Western-blot显示,其与猪源ZY05719株康复血清有良好的免疫反应性。2假定外膜蛋白Omp40及Ⅳ分泌系统VirB4蛋白对ICR小鼠免疫试验分别表达了猪链球菌2型HA9801株Omp40和VirB4两种蛋白,用表达的蛋白作为免疫原,分别或等量混合来免疫ICR小鼠,定时采血,对免疫小鼠的血清抗体水平用间接ELISA进行分析；并通过荧光定量PCR方法来检测IL-4和IFN-y表达水平。分析表明小鼠二免后14d抗体达到最高水平；Omp40免疫组的各项免疫学参数与空白对照组差异显著(P>0.05); VirB4免疫组的各项免疫学参数差异不显著(P<0.05)；Omp40和VirB4等量免疫组中IL-4差异显著(P>0.05), IFN-y差异不显著(P<0.05)。3假定外膜蛋白Omp40及Ⅳ分泌系统VirB4蛋白对斑马鱼的免疫保护力评价350尾野生斑马鱼,随机分成五组,第一、二、三组分别用已纯化的Omp40蛋白、VirB4蛋白及两种蛋白等量混合免疫,第四、五组作为对照组分别以猪链球菌2型HA9801株全菌灭活苗和灭菌PBS免疫。首免14d后用同样剂量加强免疫一次,二免后第14d用50LD50HA9801(LD50=6.6×104CFU/尾)株进行攻击,连续观察7d。结果显示,灭菌PBS对照组斑马鱼全部死亡,Omp40蛋白、VirB4蛋白及两种蛋白共同免疫组的保护率分别为22%、10%和38%,猪链球菌2型HA9801全菌灭活苗组的保护率达到64%。表明假定外膜蛋白Omp40和Ⅳ分泌系统VirB4蛋白原核表达产物免疫斑马鱼,可使其对同源菌株攻击产生一定的保护作用,为今后亚单位疫苗的研究提供了实验依据。