Hsa_circ_0112879对口腔鳞癌细胞生物学行为影响的实验研究

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研究目的:口腔鳞状细胞癌是世界上常见的恶性肿瘤,有极高的死亡率和复发率。目前,口腔鳞状细胞癌的发生发展机制尚未研究清楚。Circular RNA(CircRNAs)是一类不含有5,末端帽子和3,末端尾巴,并以共价键形成环状结构的非编码RNA。研究发现,许多circRNA在癌症发展中发挥重要作用,并且可能作为临床诊断的新型生物标志物。本次研究的目的在于检测hsacirc0112879在口腔鳞状细胞癌细胞系的表达情况,并探究其在口腔鳞状细胞癌发生发展过程中的作用及相关分子机制。研究方法:利用qRT-PCR检测四种口腔癌细胞系中hsacirc0112879的表达情况,选择合适的细胞系进行低表达实验;将siRNA转入选进的细胞中,检测siRNA干扰的效果;通过CCK-8和EdU增殖实验检测细胞的增殖能力;通过划痕和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;通过Hoechst染色实验及Annexin VFITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率;通过Western blot实验检测细胞中凋亡蛋白BAX,BCL-2的表达情况。结果:qRT-PCR检测五种细胞系(HOK、SCC9、SCC15、SCC25、CAL27)中hsacirc0112879的表达情况,结果显示:SCC15和CAL27中的表达水平最低。干扰实验qRT-PCR结果显示:口腔鳞癌细胞SCC15的干扰组较对照组中的hsacirc0112879基因表达水平下降85%左右,口腔鳞癌细胞CAL27的SiRNA干扰组比对照组中的hsacirc0112879基因表达水平下降75%左右(tSCC15=81.38,PSCC15=0.0002,***P<0.001;tCAL27=27.61,PCAL27=0.0013,**P<0.01)。CCK-8增殖实验结果显示:随着细胞生长时间的推移,SCC15和CAL27细胞的干扰组较对照组增殖逐渐升高,差异有统计学意义(*P<0.05)。EdU增殖实验结果显示:SCC15和CAL27两组细胞系中干扰组较对照组的增殖能力大(tSCC15=5.18,PSCC15=0.031,tCAL27=5.68,PCAL27=0.03,*P<0.05)。划痕结果显示:干扰组较对照组划痕迁移细胞数目增多及迁移距离增快。Transwell迁移实验结果显示:SCC15和CAL27细胞的干扰组较对照组穿过小室底的细胞数目显著增多(tSCC15=12.00,PSCC15=0.0069,**P<0.01;tCAL27=11.67,PCAL27=0.0073,**P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示:SCC15和CAL27细胞的干扰组较对照组穿过小室底的细胞数目显著增多(tSCC15=12.85,PSCC15=0.006,**P<0.01;tCAL27=9.70,PCAL27=0.011,*P<0.05)。Hoechst染色实验结果显示:SCC15和CAL27细胞的干扰组较对照组凋亡细胞显著减少(tSCC15=12.85,PSCC15=0.006,**P<0.01;t CAL27=9.70,PCAL27=0.011,*P<0.05)。Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术实验结果显示:在SCC15和CAL27细胞中的干扰组与对照组的凋亡率分别为0.97%、1.48%,0.45%、1.54%。该结果具有统计学差异(*P<0.05),结果表明低表达hsacirc0112879后,对SCC15和CAL27细胞的凋亡起抑制作用。Western blot蛋白实验结果显示:SCC15和CAL27细胞干扰组中BAX的表达水平明显下降,BCL-2的表达水平显著升高。结论:通过干扰hsacirc0112879的表达水平可以提高口腔鳞癌细胞SCC15和CAL27的增殖、迁移、侵袭,并抑制细胞凋亡。Hsacirc0112879可能在抑制口腔鳞癌发展中起到作用。
其他文献
舌鳞癌容易发生颈部转移,因此临床上对于舌鳞癌患者一般采取原发灶切除加颈部淋巴结清扫术的治疗方式,但这种治疗方案存在着不同程度的过度治疗,尤其是对临床检查颈部淋巴结阴性