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坏死性小肠结肠炎是新生儿尤其是极低出生体质量儿(VLBW)最常见的胃肠道危重症,因其缺乏特异性的早期诊断指标、病情进展变化快,往往需要NICU医师与外科医师联合干预,但目前仍缺乏有效的治疗措施。近20~30年来,随着围产医学和儿科学的发展,早产儿和VLBW儿生存率不断增加,使NEC发病率一直居高不下。早产、肠粘膜缺血缺氧、细菌异常定植以及高渗配方奶喂养是其发病的高危因素,但目前针对其发病原因及具体的致病机制仍未达成共识。因此我们进行以下两部分研究初步探讨氢气干预巨噬细胞极化可能的分子机制以及其在NEC发病中的作用。第一部分氢气调节巨噬细胞极化的分子机制研究目的:诱导巨噬细胞极化为M1型和M2型巨噬细胞,探讨氢气干预巨噬细胞极化可能的分子机制。方法:细胞实验以巨噬细胞RAW264.7和BMDM为研究对象,分别利用LPS、IFN-γ和IL-4诱导RAW264.7和BMDM巨噬细胞极化为M1型、M2型巨噬细胞。从形态学观察细胞变化;CCK-8方法检测细胞活力;流式细胞仪检测膜蛋白表达变化;RT-PCR检测巨噬细胞炎症因子表达;Western Blot检测核转录因子移位;以及划痕实验检测细胞迁移能力变化。结果:巨噬细胞经LPS(20 ng/ml)、IFN-γ(50 ng/ml)极化为M1型巨噬细胞,细胞轴突少而细长;经IL-4(20 ng/ml)极化为M2型巨噬细胞,胞体呈圆盘状,轴突多而短小。氢气对巨噬细胞的活力无显著影响。M1型巨噬细胞中iNOS、TNF-α及IL-1β在mRNA水平明显上调,M2型巨噬细胞Arg-1、IL-10和YM-1在mRNA水平明显上调(P<0.05)。氢气干预后M1型巨噬细胞膜蛋白CD16/32表达下降,核转录因子NF-κB(P65)入核减少,均有显著差异(P<0.05),并降低M1型巨噬细胞的迁移能力。氢气对M2型巨噬细胞的极化及功能无显著影响(P>0.05)。结论:氢气可通过减少核转录因子NF-κB(P65)移入细胞核,降低M1型巨噬细胞炎症因子表达,并降低其迁移能力。第二部分氢气对新生小鼠坏死性小肠结肠炎的干预作用目的:建立新生小鼠坏死性小肠结肠炎的动物模型,观察氢气通过调节巨噬细胞极化对模型小鼠的干预作用。方法:动物实验以8-10日龄C57BL6/J小鼠为研究对象,通过缺氧、冷刺激联合人工配方奶喂养建立新生小鼠NEC动物模型,从小鼠一般情况、肠道组织病理学评分评估NEC严重程度;利用RT-PCR检测肠壁组织炎症因子表达;流式细胞仪分析脾脏、淋巴结及肠粘膜固有层巨噬细胞分型和炎症因子表达变化;Western Blot检测核转录因子NF-κB移位情况。结果:氢气摄入减轻NEC小鼠疾病严重程度,降低NEC发病率和死亡率,减少核转录因子NF-κB(P65)移位,降低肠壁炎症因子表达,并调节固有层巨噬细胞的分型。结论:氢气摄入可通过干预巨噬细胞极化调节巨噬细胞分型降低肠壁炎症因子表达而减轻NEC小鼠疾病严重程度。