肝癌中医证候分型与CyclinB1基因、AFP表达相关性实验研究

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目的:本研究通过肝癌患者临床资料及病理组织标本的收集,认识细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)及甲胎蛋白(AFP)在原发性肝癌各中医证候分型中表达的高低及组间差异的关联性,探讨祖国医学证候理论的实质,为原发性肝细胞癌中医症候提供细胞分子生物学理论基础;开展国内肝癌“中医症候”←→“基因研究”,获得原发性肝癌四种常见中医症候的基因表达特征谱,开辟肝癌中医“证”的基因诊断方法,提高原发性肝癌的中医诊疗水平及对疾病转归、预后的预测能力。  方法:本实验通过临床收集2013年10月-2015年1月就诊于西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科、肿瘤外科及陕西中医药大学附属医院外二科住院的92例肝癌患者,运用中医学整体观念、辨证论治理论,划分为湿热蕴毒证、肝郁脾虚证、血瘀毒结证及肝肾阴亏,热毒瘀滞证四种常见证型类型。手术切除或肝穿刺活检肝癌组织离体后放置10%福尔马林溶液中,石蜡包埋存档蜡块于西安交通大学第一附属医院及陕西中医药大学附属医院病理科。电子显微镜下观察肝癌细胞的分化程度、免疫组化法测定肝癌组织中CyclinB1基因的表达水平、酶联免疫法测定各组患者血清中AFP含量,测定所有入组患者的肝功能、凝血功能等生化检查及影像学检查。  结果:①患者肝癌组织中CyclinB1基因表达水平及血清AFP蛋白含量各证候间存在显著差异,共同参与原发性肝癌的发生、发展及预后。两者的表达水平可作为评估原发性肝癌进展、转归及预后的重要指标。(P<0.01)。②肝癌组织中CyclinB1基因在各中医证候中表达由高到低为:湿热蕴毒证>肝肾阴亏,热毒瘀滞证>血瘀毒结证>肝郁脾虚证>癌旁正常肝组织组(P<0.01)。③肝癌患者血清AFP含量各中医证候中由高到低结果为:湿热蕴毒证>肝肾阴亏,热毒瘀滞证>血瘀毒结证>肝郁脾虚证。(P<0.01)。④肝癌组织中CyclinB1基因表达及血清AFP含量在肝癌发生、发展中具有协同作用,其相关性分析显示:CyclinB1基因表达水平及血清AFP含量在肝郁脾虚证、肝肾阴亏,热毒瘀滞证、湿热蕴毒证、血瘀毒结证相关系数分别为:0.873、0.869、0.882及0.869,具有显著相关性,表明Cyc1inB1基因及AFP对原发性肝细胞癌发生、发展、转归及预后具有一定的协同作用。⑤研究结果显示,原发性肝癌患者肝癌组织中CyclinB1基因、血清AFP含量在肝癌实证中高表达,在肝癌虚证中表达相对较低,其机制有待进二步研究。  结论:肝癌组织中CyclinB1基因表达水平明显高于癌旁正常肝组织;CyclinB1基因表达水平与肝癌患者血清AFP含量具有相关性,在肝肾阴亏,热毒瘀滞证及湿热蕴毒证中都处于高表达,在肝癌虚证中表达都相对较低,表明CyclinB1基因、AFP蛋白共同参与了肝癌的发生、发展和浸润、转移,两者的表达水平可作为评估肝癌进展的重要指标;肝癌各中医证候与肝癌细胞病理Edmondson分级、肝功能child-Pugh分级、肝癌患者BCLC分期有一定相关性,与肝癌组织分化程度关联性不明显。
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