论文部分内容阅读
目的:通过检测卵巢癌SKOV3细胞株和卵巢癌SKOV3/DDP细胞株mi R-1271的表达情况,研究mi R-1271在卵巢癌SKOV3/DDP细胞顺铂耐药形成中的作用。方法:1.采用实时定量PCR方法检测卵巢癌SKOV3/DDP细胞mi R-1271的表达。2.MTT法检测在耐药细胞株中瞬时转染mi R-1271模拟物后卵巢癌SKOV3/DDP细胞对顺铂的IC50。3.运用流式细胞术检测瞬时转染mi R-1271模拟物后SKOV3/DDP细胞对顺铂诱导的凋亡。4.构建XIAP-3’-UTR荧光素酶报告质粒验证mi R-1271的靶基因。5.采用Western blot检测卵巢癌SKOV3/DDP细胞和母代SKOV3细胞中抗凋亡蛋白XIAP表达。检测瞬时转染mi R-1271模拟物后卵巢癌SKOV3/DDP细胞中XIAP的表达。结果:1.mi R-1271在卵巢癌SKOV3/DDP细胞中呈低表达。与母代卵巢癌SKOV3细胞比较,卵巢癌SKOV3/DDP细胞中mi R-1271的表达明显降低(P<0.01),下调倍数为4.7±0.3。2.在耐药株中上调mi R-1271后显著增加卵巢癌SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性。转染mi R-1271模拟物的实验组对顺铂的IC50为(4.1±0.4)μg/m L,转染mi RNA模拟物对照的实验组对顺铂的IC50为(16.8±0.4)μg/m L(P<0.01)。3.在耐药株中上调mi R-1271显著增加卵巢癌SKOV3/DDP细胞对顺铂诱导的凋亡。转染mi R-1271模拟物的实验组对顺铂诱导的凋亡率为(14.5±1.1)%;转染mi RNA模拟物对照的实验组凋亡率为(6.1±0.8)%。4.荧光素酶报告实验提示XIAP是直接受mi R-1271调控的靶基因,转染mi R-1271模拟物的实验组中XIAP-3’-UTR荧光素酶报告质粒的活性显著降低,转染mi RNA模拟物对照的实验组降低(1.9±0.1)倍。5.抗凋亡蛋白XIAP在卵巢癌SKOV3/DDP细胞中呈高表达。与母代卵巢癌SKOV3细胞比较,抗凋亡蛋白XIAP在卵巢癌SKOV3/DDP细胞上调倍数为(1.8±0.1)倍(P<0.01)。6.在耐药株中上调mi R-1271显著抑制卵巢癌SKOV3/DDP细胞中XIAP蛋白表达水平。与转染mi RNA模拟物对照组相比降低(2.2±0.2)倍。结论:1.相对于亲代卵巢癌细胞株SKOV3,顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP中mi R-1271表达降低,XIAP表达升高。2.上调mi R-1271模拟物能够提高顺铂耐药卵巢癌癌细胞株SKOV3/CDDP对顺铂药物的敏感性,降低XIAP的表达。3.XIAP是mi R-1271直接作用的靶基因。4.mi R-1271靶向抑制XIAP表达可增加卵巢癌SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性。