近年来,由粪肠球菌引发的伤口感染、胃肠道疾病、呼吸道疾病、泌尿道或生殖道感染等疾病逐渐增加,不断有动物和人因粪肠球菌感染而发病导致死亡的严重案例。由于抗生素的广泛使用甚至滥用,使得粪肠球菌的耐药性也在逐渐增强,此外,粪肠球菌还会形成生物被膜[4],给临床治疗带来了巨大的难度。该菌严重威胁人类的生产生活和公共卫生安全。试验首先合成并鉴定了抗菌肽LL-37,通过其对不同菌种的杀菌作用比较,证明LL-37在单独使用时无法对粪肠球菌起到良好的杀菌效果;另外,在先前工作的基础上,表达纯化了酰胺酶Ply,并进行了LL-37与Ply单独及联合作用粪肠球菌杀菌效果比较,以及生物被膜的形成抑试验。结果发现,LL-37与Ply在联合作用下,可对粪肠球菌起到良好杀菌效果。为探究其原因,在提取了粪肠球菌细胞壁后,以LL-37与Ply共同对细胞壁进行降解并结合透射电镜下直观观察,以及截取酰胺酶Ply结合细胞壁SH3b区域制备重组蛋白Ply SH3b,再通过荧光染色确定其对粪肠球菌细胞壁的结合位置的确定,基本明确了LL-37与Ply单独与联合杀菌效果相差甚远的原因。为进一步探究LL-37与Ply对小鼠粪肠球菌感染的治疗效果,先通过腹腔攻菌的方式构建了小鼠粪肠球菌感染模型[16],确定最小致死量2×108CFU为后续攻菌量,然后分别采用抗菌肽LL-37与酰胺酶Ply单独及联合方式对其进行治疗,对比小鼠治疗后的健康状况、保护率、脏器荷菌量情况、脏器组织和病理学变化。实验结果显示,与未治疗组相比,使用抗菌肽LL-37或酰胺酶Ply单独治疗下,未能对粪肠球菌感染小鼠起到良好的治疗作用,而在LL-37与Ply联合治疗下,粪肠球菌感染小鼠健康状况显著提高,存活率提升,各脏器荷菌量大幅度减少,脏器组织病理学变化明显转好,表明在LL-37与Ply联合应用下可对粪肠球菌感染小鼠起到良好的治疗作用。本研究从理论与实上证实了联合应用LL-37与Ply对粪肠球菌具有良好的杀菌效果,为未来有关耐药菌的临床治疗及新药研发拓宽了新思路,带来了新功略,具有重要的指导意义。