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目的:现代研究表明,鸡血藤总黄酮成分具有抗肿瘤的药理作用,对宫颈癌HeLa细胞的生长具有抑制作用并且安全性高。本实验从细胞水平和动物水平来揭示TGF-β 1/Notch信号通路是否与宫颈癌的发生和发展具有相关性,同时探讨鸡血藤黄酮类成分通过TGF-β 1/Notch信号通路发挥其对宫颈癌干预作用的分子机制,为壮药鸡血藤治疗宫颈癌新药的研制与开发提供科学理论及实验依据。方法:1.将鸡血藤粉碎,70%乙醇水浴回流提取,得到鸡血藤粗提物,称重,大孔树脂进行柱色谱分离,采用不同浓度的乙醇(0%,30%,70%)梯度洗脱,收集30%、70%浓度的乙醇洗脱液,干燥,称重。以芦丁为标准品,采用紫外分光光度计法检测鸡血藤粗提物和鸡血藤30%、70%乙醇洗脱物中黄酮含量。2.体内实验通过皮下注射法建立裸鼠移植瘤模型,分为7组给药,观察裸鼠的生存情况和肿瘤的生长情况;通过PCR法检测裸鼠瘤组织中Notch1、TGF-β 1、Hey1及Snail基因mRNA的表达情况;用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测裸鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量;用羟胺法测定裸鼠瘤组织超氧化物歧化酶(SOD)含量,用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量;苏木素-伊红(HE)染色法观察各瘤组织病理形态学变化。3.体外实验以人宫颈癌HeLa细胞为研究对象,采用CCK-8法观察鸡血藤总黄酮对HeLa细胞的抑制作用以及时效关系考察;采用RT-PCR检测HeLa细胞中Notch1、TGF-β 1、Hey1及Snail基因mRNA的表达情况;Western blot 法检测 HeLa 细胞中 Notch1、TGF-β 1、Hey1 及 Snail蛋白表达情况;采用倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态学改变。结果:1.壮药鸡血藤总黄酮的提取纯化及含量检测:通过紫外分光光度计法检测出鸡血藤30%乙醇洗脱部位黄酮的含量最高,为61.88%,70%乙醇洗脱部位黄酮的含量为43.13%,鸡血藤粗提物中黄酮含量为19.90%。2.鸡血藤总黄酮体内抗癌活性及其机制研究结果显示:将35只裸鼠接种人HeLa细胞悬液,一周后成瘤率100%。与模型组相比,DAPT组、阳性组、鸡血藤高中低剂量组均能抑制瘤组织的生长(P<0.01或P<0.05)。阳性组、DAPT组、鸡血藤高、中、低剂量组的抑瘤率分别为 54.93%、42.26%、40.10%、25.44%、20.83%;与模型组相比鸡血藤总黄酮高、中剂量组以及阳性组均能降低荷瘤裸鼠血清中IL-6的表达水平(P<0.05),DAPT(γ-secretase抑制剂)组显著降低了荷瘤裸鼠血清中IL-6的表达水平(P<0.01);与模型组相比鸡血藤总黄酮高剂量组以及阳性组均能降低荷瘤裸鼠血清中TNF-α的表达水平(P<0.05或P<0.01),DAPT组显著降低了荷瘤裸鼠血清中TNF-α的表达水平(P<0.01);与模型组相比,鸡血藤总黄酮高剂量组能够显著降低裸鼠瘤组织中MDA的含量(P<0.01),DAPT组及阳性组均能显著降低瘤组织中MDA的含量(P<0.01);与模型组相比,鸡血藤总黄酮高、中剂量组能够显著升高裸鼠瘤组织中SOD的活力(P<0.01或P<0.05),DAPT组及阳性组均能显著升高瘤组织中SOD的活力(P<0.01);PCR结果表明,与模型组相比鸡血藤总黄酮能够升高荷瘤裸鼠瘤组织中Notch1mRNA、TGF-β1mRNA、Hey1mRNA 及 SnailmRNA 表达(P<0.01 或P<0.05);HE染色结果显示模型组肿瘤细胞多且排列紧密,与模型组比较,阳性组、DAPT组、鸡血藤组癌细胞减少并且坏死更严重。3.鸡血藤总黄酮体外抗癌活性及其机制研究结果显示:与正常组比较,阳性组在浓度为5×10-4 g·L-1能够显著抑制HeLa细胞的增殖(P<0.01),鸡血藤总黄酮在0.025~0.8g·L-1能够显著抑制HeLa细胞的增殖(P<0.01),且抑制作用有一定的量效关系;PCR结果显示与正常组相比,阳性组、鸡血藤总黄酮组能够显著升高HeLa细胞Notch1mRNA、TGF-β 1mRNA、Hey1mRNA 及 SnailmRNA 表达(P<0.1或P<0.05);Western blot法结果显示与正常组比较,阳性组、鸡血藤总黄酮组Notch1、TGF-β 1、Hey1及Snail蛋白表达显著上升,具有显著性差异(P<0.01或P<0.05);倒置显微镜下观察细胞,与正常组相比,阳性组、DAPT((?)-secretase inhibitor)组以及鸡血藤总黄酮高中低剂量组作用于HeLa细胞后,细胞形态固缩变圆,间隙变大,呈现凋亡形态。结论:1.鸡血藤总黄酮在体内和体外均对人宫颈癌HeLa细胞有抑制作用。2.鸡血藤总黄酮对人宫颈癌HeLa细胞抑制作用与干预TGF-β1/Notch信号通路有关,鸡血藤总黄酮能够通过上调TGF-β 1,调节Notch信号通路,上调Hey1、Snail基因来抑制肿瘤的发展,同时鸡血藤总黄酮能够清除瘤组织中自由基、抑制裸鼠血清中IL-6、TNF-α的分泌,发挥抗氧化抗炎的作用,促进肿瘤细胞的凋亡来改善裸鼠瘤组织病理形态进一步抑制肿瘤的发展。