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对植物而言,从营养生长到生殖生长的转换是开花繁殖的关键阶段,在合适的时间开花对植物的繁衍以及农作物的产量有着至关重要的影响。植物开花是一个极为复杂的过程,受到内部遗传因子和外部环境条件的双重调控。经过多年来对植物开花调控途径的研究,尤其是对模式植物拟南芥的研究,已取得非常显著的成果,目前已探明5条主要的开花调控途径,分别为春化途径,光周期途径,赤霉素途径,年龄途径,自主途径。在短日照条件下,植物开花主要受到赤霉素途径和年龄途径的调控。我们前期的研究表明,WRKY12和WRKY13通过与DELLA蛋白形成复合物参与赤霉素途径调控开花,同时,它们的表达模式与发育时间密切相关,WRKY12的表达量稳步上升,而WRKY13则逐渐降低。在年龄途径中,miR156和SPL转录因子在转录水平上随年龄的发展呈现出相反的表达模式,miR156逐渐下降,SPLs逐渐增加。根据这些证据我们推测,WRKY12和WRKY13可能也参与年龄途径介导的植物开花诱导过程。为了验证这个假设,我们首先通过荧光定量PCR检测了短日照下WRKY12和WRKY13在WT,35S::MIR156和35S::MIM156植株中不同年龄阶段的表达量变化情况,定量结果显示WRKY12和WRKY13在转录水平上受到miR156的调控。大量的研究结果证明miR156主要通过靶基因SPLs转录因子实现对下游基因的调控,我们通过酵母单杂交实验(Y1H),凝胶迁移率实验(EMSA)以及染色质免疫共沉淀实验(ChIP)发现,SPL10以及其同源基因都能够直接结合WRKY12和WRKY13的启动子。原生质体瞬时表达实验结果表明,SPL10正调控WRKY12的表达,负调控WRKY13的表达。遗传实验结果表明,wrky12-2突变和WRKY13过表达能部分抑制SPL10(pSPL10::rSPL10:GFP)过表达植物的早花表型。在蛋白水平上,我们以WRKY12或WRKY13为诱饵蛋白,通过酵母双杂交实验(Y2H)证明,WRKY12和WRKY13能与SPL10及SPL2/6/11/12相互作用。研究表明SPL10通过直接激活下游靶基因miR172b的转录从而促进植物从营养生长到生殖生长的转换及开花。有趣的是我们的研究结果表明,WRKY12和WRKY13也能直接结合miR172b的启动子序列。同时,遗传实验结果显示过表达miR172b能够部分恢复wrky12-2突变体和WRKY13过表达的晚花表型,说明miR172b的确在WRKY12及WRKY13的下游发挥作用。进一步的原生质体瞬时表达实验结果显示WRKY12和SPL10协同激活miR1 72b的表达,而WRKY13抑制SPL10对miR172b的转录激活功能。综上所述,我们的研究结果表明,WRKY12和WRKY13在转录水平和蛋白水平上都参与年龄途径调控开花。在幼年期,高水平的miR156抑制SPL10的表达,导致WRKY13大量积累而WRKY12保持较低的水平,WRKY13通过直接与miR172b的启动子结合抑制其表达或与少量的SPL10相互作用形成复合物抑制SPL10的转录激活能力,从而使植物维持必要的营养生长。随着植物年龄的增长,miR156逐渐下降,导致SPL10的表达量增加,促进WRKY12而抑制WRKY13的表达,大量积累的WRKY12和SPL10协同激活miR172b的表达,最终促使植物从营养生长阶段向生殖生长阶段转化。