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他莫昔芬(Tamoxifen,TAM)是经食品和药物管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准的治疗雌激素受体阳性乳腺癌的一线药物。他莫昔芬通过与雌激素竞争雌激素受体,抑制雌激素受体的激活以及下游靶基因的转录表达,从而抑制肿瘤生长达到治疗乳腺癌的目的。随着他莫昔芬的广泛使用,研究发现在治疗乳腺癌的同时,他莫昔芬也引起了一系列的副作用,如子宫内膜癌、抑郁症和能量代谢疾病等,其中,能量代谢疾病又以非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)最为常见。临床实验证实在长期使用他莫昔芬治疗乳腺癌时,乳腺癌患者发生NAFLD的危险大大提高。TAM抑制雌激素受体活性后可诱导脂肪肝,这提示雌激素受体(Estrogen receptor,ER)信号通路参与了TAM诱导的NAFLD,但具体机制仍不明确。大量研究表明,肝X受体(Liver X receptor,LXR)在包括脂质代谢、胆固醇代谢等多种能量代谢过程中发挥着至关重要的作用,但LXR在TAM诱导的NAFLD中的作用尚未可知。维生素D(Vitamin D,VD)是一种常见的脂溶性维生素,可以从阳光或食物中获取。临床研究表明体内维生素D含量与脂肪肝的发病率呈负相关,且实验研究也证实维生素D可以缓解非酒精性脂肪肝。但维生素D对药物引起的非酒精性脂肪肝是否也具有同样作用尚不可知。因此,明确维生素D是否可以干预他莫昔芬诱导的非酒精性脂肪肝及其作用机制,可以为临床预防使用他莫昔芬治疗乳腺癌时的副作用提供一种可能的干预措施。目的:本研究采用C57BL/6雌性小鼠作为体内模型,探讨TAM以及VD对小鼠非酒精性脂肪肝的影响。体外模型采用HepG2肝癌细胞作为研究对象,进一步探讨TAM对肝细胞脂质代谢的影响和机制,以及VD对脂质代谢紊乱的作用和机制,为临床上服用TAM治疗乳腺癌后导致非酒精性脂肪肝的营养干预提供更多的实验证据。方法:采用甘油三酯检测试剂盒以及油红O染色检测HepG2细胞以及小鼠肝脏组织中的甘油三酯含量;采用实时定量PCR检测体内外Srebp-1c的表达;采用蛋白质免疫共沉淀试验检测体内细胞中雌激素受体和肝X受体的结合情况,以及p300、NCOR与雌激素受体/肝X受体复合物的结合情况。结果:一、ER/LXR复合物在TAM诱导肝脂质代谢紊乱过程中的作用1.TAM对小鼠基础指标的影响:将雌性C57BL/6小鼠随机分为3组:正常饲料组(Normal diet group,ND)、他莫昔芬组(Tamoxifen group,TAM)和他莫昔芬联合维生素D组(Tamoxifen+Vitamin D group,TAM+VD),每组10只小鼠,饲养15周。结果显示,TAM会减少小鼠摄食量和体重但不影响小鼠肝重。2.TAM对小鼠肝脏脂代谢的影响:TAM上调了小鼠肝脏组织中成脂基因Srebp-1c的表达,促进TG在小鼠肝脏组织中的堆积。3.TAM对体外细胞脂代谢的影响:在提供低剂量油酸(0.1m M)作为原料的前提下,用10μM TAM处理24h,与对照组相比,TAM通过促进Srebp-1c的表达诱导了HepG2细胞甘油三酯蓄积。4.ER/LXR信号通路在TAM诱导体外细胞脂代谢紊乱中的作用:ER与LXR/RXR异源二聚体结合形成一个复杂的多元受体复合物,TAM并不直接影响ER/LXR复合物的结合力,而是通过促进ER/LXR复合物上NCOR的解离以及p300的招募上调Srebp-1c的表达,从而促进HepG2细胞甘油三酯蓄积。二、ER/LXR复合物在VD缓解TAM诱导的肝脂质代谢紊乱过程中的作用1.VD对小鼠基础指标的影响:VD不会影响TAM引起的小鼠摄食量及体重的减少,并且对小鼠肝重也无影响。2.VD对TAM诱导的小鼠肝脏脂代谢紊乱的影响:VD可以抑制TAM引起的Srebp-1c的表达增加,缓解TAM介导的TG在肝脏中的沉积。3.体外模型中,1,25D对TAM诱导肝脂代谢紊乱的影响:VD抑制了TAM诱导的Srebp-1c表达增加,减少TG合成。4.ER/LXR信号通路在VD缓解TAM诱导体外细胞脂代谢紊乱中的作用:与TAM一样,VD并不影响ER与LXR的结合能力,而是通过促进ER/LXR复合物上p300的解离以及NCOR的招募使Srebp-1c的表达减少,从而缓解了TAM介导的脂代谢紊乱。结论:本课题利用HepG2细胞作为体外模型,C57BL/6小鼠作为体内模型,研究发现TAM通过促进ER/LXR复合物上NCOR的解离以及p300的招募上调Srebp-1c的表达诱导肝脂代谢紊乱。相反,VD通过促进ER/LXR复合物上p300的解离以及NCOR的招募抑制TAM引起的Srebp-1c的表达增加,从而缓解肝脂代谢紊乱。