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柯萨奇病毒(Coxsackievirus,CV)可引起呼吸道感染、HFMD、发热性皮疹、疱疹性咽峡炎、及心肌炎、急性弛缓性麻痹和脑炎等疾病，柯萨奇A组16型VP1蛋白（CVA16VP1）是肠道病毒的主要的主要治病病原体。其VP1基因区编码的蛋白大多数都是CVA16病毒的抗原决定簇并决定病毒的抗原性。现阶段对于CVA16的研究还很薄弱，因此，本研究旨在通过基因原核表达与蛋白纯化获得VP1蛋白，并初步建立CVA16-IgM的酶联免疫捕获法，作为试剂制备和疫苗的评价方法。本实验在安排和设计阶段做了很多工作：首先，根据实验室保存的含CVA16VP1、VP2和VP3全长序列克隆菌的测序报告，采用primer5.0软件设计VP1编码区上下游引物，从CVA16培养物当中扩增VP1蛋白基因序列，构建重组表达质粒pET-41a(+)/VP1；其次，进行菌落PCR来确定阳性克隆菌落，并双酶切初步鉴定为阳性的重组质粒pET-41a(+)/VP1转化大肠杆菌BL21-Gold (DE3) pLysS，测序验证正确后诱导表达，产物经SDS-PAGE分析蛋白表达情况，若结果与预期一致则进行诱导条件优化及表达产物纯化，并进行Western Blot鉴定免疫反应性；最后，通过辣根过氧化物酶标记纯化后的重组蛋白VP1，以棋盘滴定法初步确定包被浓度和酶结合物使用浓度，初步建立ELISA捕获检测方法。在经过了上述一系列是的实验后，我们获取了一定的成果：首先，成功扩增CVA16VP1蛋白基因片段，构建了重组质粒pET-41a(+)/VP1；其次，构建了可高效表达CVA16VP1蛋白的原核表达菌株，并确定了最佳诱导表达条件；SDS-PAGE表明重组蛋白与预期一致且呈包涵体表达；经亲和层析和离子交换层析法纯化，获取了纯化后蛋白的浓度，通过Adobe photoshop cs6分析得出重组蛋白的纯度；经Western Blot检测证实重组蛋白VP1能与相应抗体发生反应，具有良好的抗原性；最后，确定抗μ抗体最佳包被浓度和酶标抗原的最佳稀释倍数，初步建立了CVA-IgM的ELISA捕获检测方法。该方法特异性、灵敏度较好，有望用于柯萨奇病毒感染的早期诊断。