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原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)是我国常见的恶性肿瘤之一,近年来其死亡率呈缓慢上升趋势。据1995年卫生部门统计,PHC患者死亡率为20.37/10万,其中男、女性死亡率分别为29.01/10万和11.21/10万,男性在农村仅次于胃癌,城市仅次于肺癌居第二位,女性仅次于胃癌和食管癌居第三位。流行病学调查发现PHC与HBV感染关系密切,HBsAg阳性者其PHC的相对危险度为正常人群者的98倍。研究表明,我国PHC的主要病因是病毒性肝炎感染(主要为乙型和丙型),而乙型肝炎病毒(HBV)是PHC最常见的病因,我国PHC患者HBV标记阳性达90%左右。据调查,我国人群乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的感染率高达10%,感染人数众多。PHC的症状主要来自PHC本身以及其肝病背景,早期可无症状,直径小于5cm的PHC患者70%一般无症状,一旦症状出现,肿瘤已处于晚期,预后甚差,严重威胁着人类的健康,早期诊断、早期治疗是改善患者预后的关键。甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)是临床最常用的诊断肝癌肿瘤标志物,可在出现症状前6～12个月做出诊断,在肝癌的诊断、鉴别诊断、判断预后、疗效评估、复发监测以及肝癌筛查中具有重要的地位。但受多种因素影响,约有30%的肝癌患者AFP检测为阴性,在肝癌的诊断中存在一定局限。寻找其它有效的肝癌肿瘤标志物、应用多种肿瘤标志物与AFP联合诊断对弥补AFP诊断肝癌的不足、实现对肝癌的早期发现、早期诊断、早期治疗的“三早”目标有十分重要的作用。研究发现,胰岛素样生长因子家族(IGFs)在肝细胞癌变的序列事件中存在异常表达。本课题通过测定正常人群、HBsAg(+)人群和PHC患者血清中胰岛素样生长因子轴(insulin-like growth factor system,IGFs)的水平,探讨血清IGFs与AFP联合检测对PHC的诊断价值;探索有效的PHC的诊断和疗效评估,提目的1.研究IGFs在正常人群组、HBsAg(+)人群组及PHC患者中的表达水平及其差异;2.研究血清中IGFs与AFP的相关性;3.研究血清中IGFs在PHC诊断中的灵敏度及特异性;4.研究IGFs在PHC组乙肝病毒血清学标志物(hepatitis B virus serological markers,HBV-DM)阳性患者与阴性患者中的阳性率差异;5.研究血清中IGFs在PHC患者术前与术后的的表达差异和经肝动脉化疗栓塞术(transcatheter hepatic arterial chemoembolization,TACE)前与TACE后的表达差异;6.研究血清IGFs与AFP联合检测对PHC的诊断价值。材料和方法1.病例选择:随机选取广州医药卫生科技项目(2006-Zda-005)《广州社区人群原发性肝癌的危险因素、社区干预与综合防治研究课题》调查人群中的正常人群20例,HBsAg(+)组27例;搜集广州医学院附属肿瘤医院2007.9～2009.2收治的PHC初治患者37例,其中行手术治疗12例,TACE术治疗25例。取以上四组患者空腹静脉血,PHC组行手术及TACE治疗的患者于术前、术后1周和术后2周各抽取一次静脉血,分离血清置于-80℃冰箱保存待测。2.检测方法:采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法测定四组人群血清中IGF-1、IGF-2、IGFBP-2和IGFBP-3的水平;采用电化学发光法测定四组人群血清中AFP水平。3.统计分析:本研究全部数据使用SPSS13.0 for windows统计软件计算机处理,各项指标的测定结果均以x±s表示,采用的统计学方法有:各组间的均数差异性比较采用单因素方差分析;两水平多因素重复测量数据资料采用重复测量数据的方差分析;率的比较采用卡方检验;不同指标间的相关性采用直线相关分析;显著性水准均为а=0.05。以估计95%正常参考值范围的上限或下限为界值,根据公式x±1.645s计算出血清IGF-1、IGF-2、IGFBP-2和IGFBP-3的界值。IGF-2和IGFBP-2大于等于此界值者为阳性,低于此界值者为阴性;IGF-1和IGFBP-3低于等于此界值者为阳性,大于此界值者为阴性。结果血清IGF-1、IGF-2、IGFBP-2、IGFBP-3和AFP在正常人群组、HBsAg(+)人群组及PHC患者中均有表达。HBsAg(+)人群组与正常人群组IGF-1、IGF-2、和AFP的血清浓度比较,差异无统计学意义(p=0.095、p=0.327、p=1.000);HBsAg(+)人群组与正常人群组IGFBP-2,IGFBP-3血清浓度的比较,差异有统计学意义(p=0.014、p=0.000);PHC组与正常人群组IGF-1、IGF-2、IGFBP-2、IGFBP-3和AFP的血清浓度比较,差异有统计学意义(p=0.000、p=0.000、p=0.000、p=0.000、p=0.000);PHC组与HBsAg(+)人群组IGF-1、IGF-2、IGFBP-2、IGFBP-3和AFP血清浓度的比较,差异有统计学意义(p=0.000、p=0.000、p=0.000、p=0.000、p=0.000)。在PHC组中,IGF-1、IGF-2、IGFBP-2、IGFBP-3、和AFP阳性率分别为59.46%、64.86%、54.05%、48.65%及81.08%,经卡方检验五组阳性率的比较,差异无统计学意义(p=0.357)。在7例AFP阴性PHC患者中IGF-1、IGF-2、IGFBP-2和IGFBP-3的阳性检出例数分别为42.86%、71.43%、71.43%和42.86%。IGF-1、IGF-2、IGFBP-2、IGFBP-3和AFP对PHC患者单独检测的灵敏度分别为63.33%、63.33%、50.00%、50.00%和81.08%,特异性分别42.86%、71.43%、71.43%、42.86%和73.46%;AFP分别与IFG-1、IGF-2、IGFBP-2、IGFBP-3联合检出率为81.19%、94.60%、94.60%和81.19%,AFP联合IGF-2和IGFBP-2高于AFP单独检出的阳性率,差异具有统计学意义(p<0.05)。PHC患者血清中IGF-1、IGF-2、IGFBP-2、IGFBP-3和AFP在HBV-DM阳性患者与阴性患者的阳性率分别为62.07%、71.43%、50.00%、39.29%和96.41%;44.44%、44.44%、66.67%、77.78%和66.41%。IGFBP-3阳性率在HBV-DM阳性患者中明显低于阴性患者(p<0.05);AFP的阳性率在HBV-DM阳性患者中明显高于阴性患者(p<0.05);在PHC组IGF-1、IGF-2、IGFBP-2和IGFBP-3分别在术前和术后1周与术后2周的比较,差异具有统计学意义(p<0.05);在PHC组IGF-1、IGF-2、IGFBP-2和IGFBP-3分别在介入前和介入后1周与介入后2周的比较,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论1. IGF-1和IGFBP-3的浓度水平在正常人群组、HBsAg(+)组和PHC患者的检测阳性率依次降低,而血清IGF-2、IGFBP-3水平在正常人群组、HBsAg(+)组和PHC患者的检测阳性率依次升高,提示血清IGF-1、IGF-2、IGFBP-2、IGFBP-3浓度水平与PHC的发生发展密切相关;2. PHC患者血清IGF-2、IGFBP-2水平与AFP呈明显正相关,提示血清IGF-2、IGFBP-2水平越高,AFP水平也越高;而IGF-1与IGFBP-3与AFP水平呈明显负相关性,提示血清IGF-1和IGFBP-3水平越高而AFP的水平越低;3. PHC患者血清IGF-1、IGF-2、IGFBP-2、IGFBP-3浓度检测不仅可作为PHC诊断筛查指标,也可以作为AFP阴性PHC的诊断指标;4. PHC患者血清IGF-1、IGF-2、IGFBP-2、IGFBP-3和AFP联合检测可以提高PHC患者阳性检出率,对PHC患者有一定的诊断价值;5. PHC患者血清IGFBP-3水平与HBV感染关系密切,HBV感染者IGFBP-3水平较未感染者明显增高;血清IGF-1、IGF-2和IGFBP-2水平与HBV感染无关联;6. PHC患者血清IGF-1、IGFBP-3治疗后浓度水平比治疗前明显升高,而IGF-2和IGFBP-2治疗后浓度水平比治疗前明显降低,提示血清IGF-1、IGF-2、IGFBP-2、IGFBP-3水平浓度可以用于判断PHC患者的治疗疗效评估。