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目的： 应用luminex xMAP技术建立一种液态芯片,能够快速、准确检测多种呼吸道病毒,包括人冠状病毒-NL63(HCoV-NL63)、-HKU1(HCoV-HKU1)、-OC43(HCoV-OC43)、-229E(HCoV-229E),人偏肺病毒(HMPV)和人博卡病毒(HBoV)。建立荧光定量PCR技术检测InfVA,InfVB,RSV,PIV1,PIV2,PIV3,Adenovirus,HCoV-NL63、-HKU1、-OC43、-229E,HMPV和HBoV。应用建立好的以上方法检测福州地区急性呼吸道感染儿童呼吸道病毒病原并进行临床分析。 方法： 应用DNAMAN7软件设计对病毒保守区的引物和探针,建立针对以上病毒的液态芯片和FQ-PCR法。收集2011年12月~2012年9月福建省立医院住院部儿科病房急性呼吸道感染患儿的咽拭子标本,共计299例。利用建立好的液态芯片和FQ-PCR检测收集到的标本。 结果： 1、建立的液态芯片检测灵敏度除GAPDH和HCoV-OC43为103copies/μl~108copies/μl外,其它病毒如HCoV-NL63、HCoV-229E、HCoV-HKU1、HMPV和HBoV均在104copies/μl~108copies/μl之间。液态芯片特异性试验中7种荧光微球能够检测出相应靶病毒,不与其它病毒发生交叉反应,特异性好。其批内批间重复性实验结果显示中位荧光强度值变异系数分别在0.52％~1.39%和1.92%~3.44%范围内。 2、建立的InfVA、InfVB、RSV、PIV1、PIV2、PIV3、Adenovirus、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、HCoV-OC43、HCoV-229E、HMPV和HBoV的荧光定量PCR法有良好的敏感性与特异性。 3、2011年12月~2012年9月福州地区收集的299例急性呼吸道感染患儿中,HCoV-NL63、HCoV-HKU1、HCoV-OC43、HCoV-229E、HMPV与HBoV分别检出10例(3.3%)、2例(0.7%)、21例(7.0%)、3例(1.0%)、18例(6.0%)、26例(8.7%)。InfVA、InfVB、RSV、PIV1、PIV2、PIV3、Adeno分别检出5例(1.7%)、7例(2.3%)、54例(18.1%)、1例(0.3%)、1例(0.3%)、12(4.0%)、42(14.0%)。ARTI患儿病毒总检出率为58.9%。病毒检测阳性患儿中11.9%(21/176)存在2-4种病毒的混合感染。HCoV-OC43、-229E、-NL63感染高峰在春季,HCoV-HKU1、HMPV,HBoV感染高峰在冬春季,主要侵犯≤1岁儿童。 结论： 1、本研究成功建立了能并行检测冠状病毒NL63、-HKU1、-OC43、-229E,HMPV和HBoV的液态芯片法。 2、2011年11月~2012年9月福州地区急性呼吸道感染患儿中,存在InfVA、InfVB、RSV、PIV1、PIV2、PIV3、Adenovirus、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、HCoV-OC43、HCoV-229E、HMPV和HBoV的感染。 3、呼吸道病毒的检测有助于急性呼吸道感染病毒病原学早期诊断,有利于指导临床合理用药,达到早治疗、早康复的目的。