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猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis，TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus of swine，TGEV）引起的以呕吐、严重腹泻和脱水为特征的一种高度接触性传染病，各种年龄的猪均可发病，但2周龄以内的仔猪发病率和死亡率最高。该病爆发能导致初生仔猪大批死亡，给养猪业带来巨大的经济损失。本实验室对于益生菌菌体作用开展的研究较多，而代谢产物的研究尚不够深入，所以，本研究选择益生菌代谢产物来研究益生菌对抗TGEV感染肠细胞的效果，旨在更加深入研究其作用机制。本研究的主要目的是利用传代细胞模型评价益生菌代谢产物对细胞感染TGEV的影响。实验选择三株益生菌所产生的代谢产物，分别作用于猪肠上皮细胞（IPEC-J2）模型，然后检测其对：（1）TGEV感染表达量变化的影响；（2）TLR7、TLR8及iNOSmRNA表达水平的影响；（3）NO和H2O2分泌量的影响。首先，用IPEC-J2细胞模型研究所选三株益生菌代谢产物对TGEV粘附细胞及其在细胞内复制的影响。实验设计形成单层的IPEC-J2细胞在感染病毒之前，分别用三株益生菌的代谢产物进行预处理，然后在TGEV感染细胞后的2h和72h收获细胞，用荧光定量PCR方法分别检测2h的TGEV粘附量和72h的表达量。实验结果显示，三株益生菌的代谢产物均能减少TGEV在细胞上的粘附量和表达量。其次，检测益生菌代谢产物对细胞的保护作用。用real-time PCR方法分析比较了：（1）正常IPEC-J2细胞；（2）用益生菌或大肠杆菌代谢产物预处理的IPEC-J2细胞；（3）TGEV感染的IPEC-J2细胞；（4）经过益生菌或大肠杆菌代谢产物预处理后感染TGEV的IPEC-J2细胞4种处理条件下TLR7，TLR8和iNOS mRNA表达水平的变化。结果表明：（1）与正常IPEC-J2细胞相比，3株益生菌代谢产物均能诱导IPEC-J2细胞的TLR7及iNOS产生显著升高，但相比TGEV感染细胞产生水平低；（2）与用致病性大肠杆菌代谢产物预处理的IPEC-J2细胞相比，3株益生菌代谢产物负向调节病毒诱导的TLR7及iNOS的产生作用显著。但TLR8变化不显著。结果提示，益生菌代谢产物对抗TGEV感染的可能机制是减少TGEV诱导肠道细胞产生炎性细胞因子。第三，为了进一步说明益生菌代谢产物对细胞的保护作用以及抗微生物效应，初步对上述4种处理条件的IPEC-J2细胞NO及H2O2分泌量进行了检测。结果表明（：1）与正常IPEC-J2细胞相比，益生菌代谢产物预处理的细胞，TGEV感染及大肠杆菌代谢产物感染的细胞NO及H2O2分泌量均有增加，但TGEV感染及大肠杆菌代谢产物感染的细胞NO及H2O2分泌量增加较为明显；（2）与TGEV感染的细胞及大肠杆菌代谢产物预处理的细胞相比，经过益生菌代谢产物预处理后感染病毒的细胞，NO及H2O2分泌量均有一定程度的降低。这一结果表明，益生菌代谢产物能刺激IPEC-J2细胞产生NO及H2O2，降低TGEV对IPEC-J2细胞的刺激，减少细胞损伤。NO分泌量的变化与iNOS mRNA表达水平的变化保持一致。综上所述，3株益生菌代谢产物均能减少TGEV在IPEC-J2细胞上的粘附量和表达量，并且能够减少TGEV诱导的IPEC-J2细胞TLR7和iNOS mRNA的表达，降低TGEV诱导的NO及H2O2的分泌量，减少细胞损伤，对细胞起到保护作用。