论文部分内容阅读
目的：卵巢癌是女性生殖系统致死率最高的恶性肿瘤，由于早期缺乏有效的诊断方法，大约70%的病人在首次就诊时已是晚期，5年生存率徘徊于30%-40%。上皮性卵巢癌占卵巢恶性肿瘤的85%-90%，因此早期诊断已成为卵巢癌诊治中最重要的问题。目前CA125是诊断上皮性卵巢癌最常用的肿瘤标志物，但是CA125的早期诊断率较低，只有50%的早期上皮性卵巢癌患者和70-90%的晚期上皮性卵巢癌患者可以检测到CA125升高，同时在一些非恶性疾病中和非卵巢恶性肿瘤中也能检测到不同程度的升高，如子宫内膜癌、肺癌、乳腺癌和肠癌等，由于CA125的假阳性率较高，而且对上皮性卵巢癌的特异性不高，因此，寻找一种或多种肿瘤标志物联合CA125检测上皮性卵巢癌，以提高上皮性卵巢癌的早期诊断率及敏感度、特异度，已成为目前研究的热点。人类线粒体DNA（mtDNA）是细胞核外重要的遗传物质，由于其缺乏组蛋白的保护，而且缺乏损伤修复系统，线粒体DNA突变在人类退行性疾病和肿瘤疾病中广泛存在，大多数突变和多态性集中在线粒体DNA D-LOOP区，我们的实验研究表明线粒体DNA D-LOOP区单核苷酸多态性与上皮性卵巢癌发病密切相关，可作为上皮性卵巢癌的一种非侵入性检测方法，本文拟通过研究线粒体DNA D-LOOP区单核苷酸多态性联合CA125的检测实验方法为上皮性卵巢癌的早期诊断提供一种新的检测方法。方法：1研究对象：①病例组：收集2005年-2009年在河北医科大学第二医院因上皮性卵巢癌行手术治疗并随访到的93例河北籍女性患者的石蜡标本，患者术前未接受过任何治疗，患者病理类型均由河北医科大学第二医院病理科两名以上主任医师确诊。②对照组：在河北医科大学第四医院体检的93例健康河北籍女性血液标本的线粒体DNAD-LOOP区DNA序列。2提取病例组和对照组的线粒体DNA，并对其纯度进行检测。3用PCR扩增方法扩增线粒体DNA D-LOOP区。4琼脂糖凝胶电泳分析，证实PCR产物为其目的产物。5PCR产物结果送往北京英维捷基生物工程技术服务有限公司进行测序，并对其序列进行分析。6使用卡方检验分析病例组和对照组之间的年龄、孕产次、CA125之间的差别，并根据FIGO分期分析上皮性卵巢癌与CA125的关系，用行乘列表卡方检验分析mtDNA单核苷酸多态性联合CA125在诊断早期上皮性卵巢癌的优势。结果：1上皮性卵巢癌患者组与对照组临床资料对比：年龄、孕产次在两者之间无差异（P值均大于0.05），CA125在两者之间有明显差异（P=0.00<0.05）。2在93例上皮性卵巢癌外周血中有187个位点发生了变化，176个属于基因多态性，11个属于基因突变。93例上皮性卵巢癌患者中60例在线粒体DNAD-LOOP区发生了突变。位点73A/G（OR，123.760；95%CI，28.338-540.495；P=0.000），207G/A（OR，4.875；95%CI，1.024-23.213；（P=0.030），523C/del（OR，1.982；95%CI，1.089-3.605；P=0.024）与上皮性卵巢癌发病密切相关，位点254T/G，259A/G，275G/A，366G/A，411C/G，414T/G，418C/G，441C/A，476C/A，524C/del，530C/T增加了上皮性卵巢癌的发病风险。位点249A/缺失（OR，2.406；95%CI，1.207-4.797；P=0.011）和263A/G（OR，3.616；95%CI，1.133-11.541；P=0.022）降低了上皮性卵巢癌的发病风险。3通过行乘列表卡方检验，两两比较CA125、不同位点线粒体DNA多态性及两种检测方法的联合对于诊断早期上皮性卵巢癌的检出率，线粒体DNAD-LOOP区单核苷酸多态性联合CA125的检测方法明显提高了早期上皮性卵巢癌的检出率。结论：1线粒体DNA D-LOOP区单核苷酸多态性与上皮性卵巢癌发病密切相关，可作为上皮性卵巢癌的一种非侵入性检测方法。2线粒体DNA D-LOOP区单核苷酸多态性联合CA125的检测方法，为上皮性卵巢癌的早期诊断提供了一种新的检测方法。