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目的:研究ras蛋白激活物类似物-1(ras protein activator like-1,RASAL1)基因在正常胃黏膜上皮细胞株及胃癌细胞株中的表达情况及其生物学意义。
方法:体外培养人正常胃黏膜上皮细胞株及三种不同分化程度的胃腺癌细胞株,分为正常对照组和高、中、低分化胃腺癌细胞组。采用RT-PCR方法和Western-blot法分别检测高分化胃腺癌细胞株MKN-28、中分化胃腺癌细胞株SGC-7901、低分化胃腺癌细胞株BGC-823和正常胃黏膜上皮细胞株GES-1中RASAL1基因mRNA水平和蛋白水平的表达,应用基因测序法检测上述三种胃腺癌细胞株中K-ras基因第一外显子第12、13密码子点突变情况,并分析其意义。结果:(1)RT-PCR结果显示,与正常胃黏膜上皮细胞株相比,高、中、低分化胃腺癌细胞株中RASAL1 mRNA的表达量分别下调47.53％、85.80％、95.86％,差异均具有统计学意义(P＜0.01)；且分化程度越低表达下调越明显,各分化程度胃腺癌细胞株之间差异亦有统计学意义(F=8098.175,P＜0.01)。(2)Western-blot结果表明,与正常胃黏膜上皮细胞相比,高、中、低分化胃腺癌细胞株中RASAL1蛋白的表达量分别下调40.12％、54.94％、63.33％,差异均有统计学意义(P＜0.01)；且分化程度越低表达下调越明显,不同分化程度胃腺癌细胞株之间的差异亦有统计学意义(F=3059.420,P＜0.01)。(3)经PCR扩增后基因测序证实三种胃腺癌细胞株中.K-ras基因第一外显子第12、13位密码子均分别为GGT、GGC,与野生型K-ras基因第一外显子第12、13密码子序列(GGTGGC)比对完全一致,表明在三种胃癌细胞中K-ras基因均未发生突变。结论:RASAL1在含野生型K-ras的三种胃腺癌细胞株中呈低表达状态,且分化程度越低,表达下调越明显。提示RASAL1表达下调不仅与胃癌的发生密切相关,可能还与胃癌的恶性程度相关。