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背景:急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)是造血系统恶性克隆性疾病,是成人急性白血病中最常见的类型。目前临床上AML的治疗方案主要包括化疗、造血干细胞移植(hemopoietic stem cell transplantation,HSCT)、靶向药物治疗和免疫细胞治疗。多药联合强化化疗和HSCT已显著改善了AML的预后。但由于老年AML发病率增多、原发或复发耐药、化疗药物相关的严重毒副作用、无合适移植供者以及移植后相关风险等原因,只有少数患者取得长期生存,因此寻找新的治疗方法是十分必要的。近年来研究发现,表观遗传学在AML的发生、发展中也发挥着重要的作用。AML表观遗传学异常调控中最主要是DNA异常甲基化和组蛋白去乙酰化。因此AML的表观基因组成为去甲基化药物联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂治疗的新靶点。目的:通过观察DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨(Decitabine,DAC)、组蛋白去乙酰化酶抑制剂西达本胺(Chidamide,CS055)单药和两药联合对U937细胞株的增殖和凋亡的作用,及对组蛋白H3乙酰化(Ac-H3)水平、DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的调控,旨在探讨两药联合对U937细胞株可能的作用机制,为临床应用提供理论和实验依据。方法:1.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测CS055、DAC单药及两药联合干预U937细胞24h、48h、72h后,细胞生长抑制情况;2.流式细胞术(FCM)检测CS055、DAC单药及两药联合干预U937细胞72h后细胞凋亡情况;3.实时定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CS055、DAC单药及两药联合干预U937细胞72h后DNMT1mRNA表达情况;4.蛋白质印迹法(Western blot)检测CS055、DAC单药及两药联合干预U937细胞72h后Ac-H3、DNMT1的表达。结果:1.MTT法检测结果示:不同浓度CS055、DAC干预U937细胞24h、48h、72h后,U937细胞生长有明显的抑制现象。随着CS055、DAC药物浓度的增加、干预时间的延长,CS055、DAC对U937细胞的生长抑制作用越来越明显,相比于空白对照组,差异有统计学意义;这表明CS055、DAC对U937细胞增殖抑制率呈明显的剂量依赖性和时间依赖性。CS055、DAC在72 h时的IC50值分别为0.42μmol/L、5.33μmol/L。在同一时间点,与单药组比较,两药联合组的抑制作用更强,有明显的统计学差异。通过统计学析因设计分析,两药间存在交互作用(24h、48h和72h F值分别是9.230、7.077、22.250。P值均<0.01),具有协同作用,表示两药物之间有明显的协同抗白血病效果。2.FCM法检测结果示:U937细胞培养72h后,对照组凋亡率为(0.67±0.12)%,0.25μmol/L CS055单药干预后凋亡率为(23.43±0.50)%,2.5μmol/L DAC单药干预后凋亡率为(8.47±0.32)%,联合用药组的凋亡率为(32.73±0.42)%。与各单药组比较,联合用药组凋亡率显著增加,组间差异有统计学意义(P值<0.01)。3.RT-PCR法检测结果示:0.25μmol/L CS055、2.5μmol/L DAC单药处理U937细胞72h后,细胞中DNMT1mRNA表达水平均显著下调;两药联合组较单药组下降更明显,差异有统计学意义(P值<0.01)。4.Western blot法检测结果示:0.25μmol/L CS055、2.5μmol/L DAC单药干预U937细胞72h后,与空白对照组相比,DNMT1蛋白表达量显著降低,Ac-H3水平明显升高,差异有统计学意义(P值均<0.01)。两药联合组,DNMT1蛋白降低及Ac-H3升高程度均较单药组更明显,差异有统计学意义(P值<0.01)。结论:1.CS055、DAC均能抑制白血病细胞株U937的生长,呈时间-剂量依赖性;2.CS055、DAC干预U937细胞后,DNMT1表达量降低,Ac-H3水平升高;3.CS055联合DAC对U937细胞有协同抑制增殖及诱导凋亡作用,其机制可能是组蛋白去乙酰化酶抑制剂还有去甲基化作用,去甲基化药物也有组蛋白去乙酰化酶抑制剂作用,两者联合既增强去甲基化作用又增强了乙酰化组蛋白作用。