应用HIV-1特异性表位多肽HLA-Ⅰ类分子四聚体分析HIV-1感染者体内特异性CTLs的研究

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目的:评价HIV-1特异性CTLs在HIV-1感染中的免疫反应,并对HIV-1特异性抗原表位多肽CTLs进行定量和功能方面的研究。方法:应用基因克隆、蛋白质表达和纯化等分子生物技术制备人HLA-A*0201限制的HIV-pol 294-302YI9(YTAFTIPSI)Tetramer,商品化HIV-gag 77-85 SL9(SLYNTVATL)Tetramer,HIV-pol476-484 IV9(ILKEPVHGV)Tetramer购自ProImmune,并应用三种Tetramer检测14例HLA-A*02阳性的HIV-1感染者外周血中的HIV-l表位多肽特异性CTLs的频度,同时采用SL9(SLYNTVATL)体外冲击HIV-1感染者的PBMCs,通过ELISPOT和ICCS方法检测产生IFN-γ的病毒特异性CTLs,初步分析特异性CTLs在HIV-1感染中的作用。结果:Tetramer SL9、 IV9和YI9检测出病毒特异性CTLs占CD8+的百分比范围分别为:0. 06%-3. 27%;0. 05%-0. 57%和0. 09%-0. 66%,其检出阳性率分别为11/14、 10/14和5/7。ELISPOT和ICCS检测的产生IFN-γ的细胞近似,但远低于Tetramer检测出的病毒特异性CTLs数量。ELISPOT和Tetramer所检测出的HIV-1表位多肽特异性CTLs频度之间有相关性(r=0. 8455,P<0. 01) 。ICCS检测的CD8T细胞中产生IFN-γ与ELISPOT检测产生IFN-γ的细胞结果一致。结论:Tetramer可以方便敏感地检测出HIV-1表位多肽特异性CThs。ELISPOT和ICCS是研究CThs功能的重要手段。高频度的HIV-1表位多肽特异性CD8+T细胞在感染者体内不同病毒载量水平上以及疾病进展的各个时期都有存在,但多于95%的Tetramer阳性的细胞是没有细胞毒性的。联合使用三种方法可以更精确地评价HIV-1感染者体内CTLs的数量、功能的动态变化,对于深入了解特异性CTLs在病毒性感染中的作用,提供了有效的平台。探索恢复CTLs功能的机制,可以为细胞免疫治疗提供实验基础。
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