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在自然界中,木质纤维素广泛存在,是最适合生产生物能源的廉价原料。木质纤维素能被许多微生物所产生的纤维素酶系所降解。嗜热真菌由于其产生的酶具有耐高温、稳定性强和不易受污染等优势,在工业应用上具有较高开发潜力。本论文利用RNAi技术研究了嗜热毁丝霉(Myceliopthora thermophila)中两转录因子CRE1、ACE1对降解木质纤维素降解酶基因的调控作用。本论文的主要研究内容如下:(1)在多种丝状真菌中,葡萄糖代谢阻遏蛋白CRE1所产生的碳源代谢阻遏作用已经被研究得比较清楚。但是它在嗜热毁丝霉(ATCC 42464)中的作用尚未报道。本论文通过RNAi技术证实了CRE1在嗜热毁丝霉中的调控作用。在诱导培养144h时,cre1沉默菌株C88的滤纸酶活性和内切β-1.4-葡萄糖苷酶活分别是野生型菌株Mt的3.76和1.31倍。在120h时,cre1沉默菌株C88中的β-葡萄糖苷酶活和外切β-1.4-葡萄糖苷酶活分别是野生型菌株Mt的2.64和5.59倍。荧光定量分析结果发现菌株C88中的egl1、cbh1和cbh2的m RNA表达量显著高于出发菌株Mt。上述结果显示,在嗜热毁丝霉中CRE1调控因子对纤维素酶相关基因有显著抑制作用。(2)ACE1是丝状真菌中另一重要调控因子。该转录因子在嗜热毁丝霉中的作用同样还未被报道。本论文利用RNAi技术证实了ACE1在嗜热毁丝霉(ATCC42464)中的调控作用。相比野生型菌株Mt,ace1基因沉默转化菌株A98的滤纸酶活性、内切β-1,4-葡萄糖苷酶活、β-葡萄糖苷酶活、外切β-1,4-葡萄糖苷酶和木聚糖酶活分别高出4.23,3.43,2.30,7.99和3.33倍。该结果表明在嗜热毁丝霉中,ACE1同样对纤维素酶基因表达有显著抑制作用。(3)另外,为了进一步提高ace1干扰菌株A98中纤维素酶的产量,我们把重组质粒p UC19-Cre1转入菌株A98中,利用高浓度潮霉素B(100μg/m L)抗性平板筛选出共转化菌株AC8。共转化菌株AC8比A98在滤纸酶活、内切β-1,4-葡萄糖苷酶活、β-葡萄糖苷酶活和外切β-1,4-葡萄糖苷酶活分别高11.47%、24.67%、2.44%和254%,但其木聚糖酶活性未发生变化。本研究结果表明,通过基因工程技术,沉默嗜热毁丝霉菌株中的cre1和ace1基因的表达,提高纤维素酶产量是一种方便快捷的途径。同一菌株中同时干扰两种转录因子ACE1和CRE1可进一步提升纤维素酶活性及发酵液总蛋白含量。