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马氏珠母贝(Pinctada martensii),是我国一种重要的海水产珠母贝。在马氏珠母贝养殖过程中,由于养殖环境的变化以及种质出现一定的退化,使得在马氏珠母贝养殖及育珠方面出现一定问题。20 世纪八十年代以来,马氏珠母贝的遗传选育工作开始受到研究人员的重视。贝类的壳色作为最直接的表观性状,贝类壳色与经济性状密切相关,使得壳色逐渐成为一个重要的选育性状。本课题组从2004年起开始对马氏珠母贝4种壳色群体进行复合选育研究,经过7年7代的群体继代选育,至2011年,已获得壳色明显,且遗传稳定的壳色选育系。2012 年 3 月,针对各壳色针对各壳色内个体存在的异质性,开展了大壳宽家系选择研究,以分化出经济性状不同的家系,为配套系的建立打下基础。本研究利用已经构建的四种不同壳色大壳宽家系F1,采用 SSR 标记研究各壳色家系间的遗传多样性,采用中心复合设计及相应曲面法研究温度、盐度的互作效应对分别不同壳色家系马氏珠母贝抗氧化力的影响,以验证壳色选育的效果,比较不同壳色马氏珠母贝在抗逆水平上的差异,为马氏珠母贝的养殖健康环境的预测及遗传育种提供基础资料。 1、采用微卫星(SSR)分子标记技术,利用 6 对微卫星引物分析了马氏珠母贝白色(W)、黑色(B)、黄色(Y)、红色(R)四种壳色家系的遗传结构。结果表明, 4种壳色家系在6个位点的平均等位基因数(Na)为4.17,有效等位基因数(Ne)为1.297~1.819。平均观测杂合度(Ho)为 0.083~0.212,平均期望杂合度(He)为0.207~0.341。Shannon 多样性指数(I)为 0.366~0.616。平均多肽信息(PIC)含量为0.257~0.442。4个壳色家系哈-温平衡指数均发生了极显著的偏离,6个位点4个家系间的Fst值为0.113~0.793。与普通养殖群体及壳色选育系相比,马氏珠母贝四种壳色家系之间遗传距离变大,遗传多样性降低。 2、研究了不同温度(18℃~34℃)及不同盐度(20~40)的互作效应对四种壳色马氏珠母贝总抗氧化力(T-AOC)水平、丙二醛(MDA)含量的影响,建立了温度、盐度对四种壳色马氏珠母贝T-AOC水平、MDA含量的定量关系模型,从生化水平上对比不同壳色马氏珠母贝对环境因子变化表现的抗逆差异,实验结果表明:白、黑、红、黄四个壳色家系T-AOC水平变化的回归方程的决定系数R2范围为0.9613~0.9793,校正决定系数R2范围为0.9225~0.9585,预测决定系数R2范围为0.6129~0.8131,所建立的四个方程拟合度高,所建立的模型恰当。白、黑、红、黄四个壳色家系MDA 含量变化的回归方程的决定系数 R2范围为 0.9782~0.9990,校正决定系数 R2范围为0.9564~0.9979,预测决定系数R2范围为0.8061~0.9902,所建立的四个方程拟合度高,所建立的模型恰当,能准确反映出四种不同壳色马氏珠母贝T-AOC水平,MDA含量随温度、盐度变化的趋势,经过对模型的系数显著性检验及方差分析,结果表明黑壳色马氏珠母贝在温度、盐度的胁迫下,在T-AOC水平、MDA含量上表现出的抗逆能力优于其余三种壳色马氏珠母贝。 3、研究了不同温度(18℃~34℃)及不同盐度(20~40)互作效应对四种壳色马氏珠母贝GPx基因表达量的影响,建立了温度、盐度对四种壳色马氏珠母贝GPx基因表达量的定量关系模型,从分子水平上对比不同壳色马氏珠母贝对环境因子变化表现的抗逆差异,实验结果表明:温度的一次效应对四种壳色马氏珠母贝 GPx 基因表达的影响极显著,盐度的一次效应只对黑壳色马氏珠母贝 GPx 基因表达影响显著。温盐互作效应对黑、红、黄壳色马氏珠母贝 GPx 基因表达的影响显著。温度的二次效应对四种壳色马氏珠母贝 GPx 基因表达的影响极显著。盐度的二次效应对白壳色马氏珠母贝GPx基因表达的影响显著,对黑、红、黄壳色马氏贝GPx基因表达的影响极显著。建立的温度和盐度互作对马氏珠母贝 GPx 基因表达影响的模型显著,四个壳色家系的回归方程的决定系数R2范围为0.9713~0.9958,校正决定系数R2范围为0.9426~0.9915,预测决定系数R2范围为0.7139~0.9680,所建立的四个方程拟合度高,模型恰当,能准确反映出四种不同壳色马氏珠母贝 GPx 基因表达量随温度、盐度变化的趋势,经过对模型的系数显著性检验及方差分析,结果表明黑壳色马氏珠母贝在温度、盐度的胁迫下,在 GPx 基因表达量上表现出的抗逆能力优于其余三种壳色马氏珠母贝。