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中枢神经系统(central nervous system,CNS)脱髓鞘性疾病是多发于青年人的神经系统常见病。目前认为它的发病涉及遗传、病毒、免疫、环境地理等诸多方面。虽然其确切的病因和发病机理尚不十分清楚,但许多研究表明免疫学因素在中枢神经系统炎性脱髓鞘病中起着关键性的作用。与其他自身免疫性疾病相似,自身抗原、非特异性T细胞活化和T细胞介导的炎症反应共同参与了脱髓鞘疾病的发病过程。髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)既是神经髓鞘的重要成份,又是CNS脱髓鞘疾病的重要抗原。用MBP加免疫佐剂诱发易感动物可以产生实验性变态反应性脑脊髓炎(experimentalallergic encephalomyelitis,EAE),由于它在临床表现、免疫病理和免疫化学方面与人类CNS脱髓鞘疾病有很多相似之处,因而是研究CNS脱髓鞘病,特别是多发性硬化(multiplesclerosis,MS)的经典动物模型。用EAE易感动物的脾脏单个核细胞(splenic mononuclear,SMC)和树突状细胞(dendriticcell,DC)等在离体条件下与MBP共培养,可用于探索和研究它们在EAE发病和治疗中的作用。DC作为机体内功能最强的抗原呈递细胞(antigen presenting cell,APC),目前已知其具有启动免疫应答和免疫耐受双重作用,参与机体免疫反应的调节。CD4~+T辅助细胞(T help cell,Th)根据其分泌的细胞因子的不同,分为Th1和Th2细胞。Th1细胞分泌IL-2、IFN-γ、IFN-β等,介导细胞免疫;Th2细胞分泌IL-4、IL-5、IL-6、和IL-13等,介导体液免疫或变态反应性疾病的发生。Th1和Th2细胞分泌的细胞因子可以相互作用调节Th1/Th2细胞的平中文摘要衡。一旦平衡破坏,则导致许多自身免疫性疾病的发生。DCI诱导Thl细胞的应答,DCZ诱导ThZ细胞的应答。从理论上讲,通过调节DCI/DCZ来调控Thl/ThZ的应答平衡,可以阻止Thl细胞介导的细胞免疫或ThZ介导的体液免疫反应的发生。 本实验采用体外细胞培养的方法,分离EAE易感性动物BALB/c小鼠脾脏单个核细胞,在不同培养条件下与MBP共培养,然后用抗DCI和抗OCZ标志性抗原的荧光抗体标记细胞,通过流式细胞仪检测DCI/DCZ之间的比例变化,选择DC前体细胞向OCZ分化增多的最佳培养条件(细胞因子),促使DC前体细胞在抗原MBP的刺激下向DCZ定向分化,进一步调控Tho细胞向ThZ分化,为将来采用药物调控中枢神经系统脱髓鞘性疾病DC前体细胞向DCZ定向分化,从而下调Thl细胞的功能,上调ThZ细胞的功能,促进疾病恢复或减少复发提供理论基础。 本研究的主要结果如下:①在GM一CSF和工L一4培养条件下,MBP刺激树突状细胞前体CDllc的表达明显增强,实验组(MBP组)平均荧光强度为:856.93士12.45,对照组(不加MBP组)为:827.05士17.38,t二5.41,尸<0.001,二者具有极显著性差异。②在MBP和GM一CSF培养条件下,工L一4能够明显刺激CDllC的表达。实验组平均荧光强度为:856.93士12.45,对照组为:708.58士21.25,t二21.42,尸<0.001。二者具有极显著性差别。③在GM一CSF和MBp培养条件下,IL一3能够明显上调树突状细胞CD8a的表达,实验组平均荧光强度为:7751.70士296.63,对照组为:7279.17士176.77,乙=5.13,P<0.001。二者具有极显著性差别。 本实验提示:牛脊髓MBP在GM一CSF和工L一4培养条件下可以刺激EAE易感动物BALB/c小鼠脾脏DC前体细胞向DCI分化,进一步提示在MBP诱发的EAE中DC前体细胞向DCI分化明显增强。工L一4可以进一步促进BALB/c小鼠脾脏DC前体细胞向DCI分化,而IL一3则促进DC前体细胞DCZ分化。