作为细胞核激素受体的核心转录共激活因子,p160家族的三个同源成员蛋白(SRC1,SRC2和SRC3)中的SRC1(NCOA1)在1995被发现,之后SRC2(也称TIF2,GRIP1或NCOA2)和SRC3(也称P/CIP,RAC3,AIB1,ACTR,TRAM1或NCOA3)相继被发现。大量的文献报道SRCs家族成员不仅是细胞核激素受体的关键转录共激活因子,还广泛参与其它转录因子的转录调控,此外SRC3还在癌症中扮演重要的作用。SRC3以及SRC1在1997年被报道具有乙酰化修饰酶活性,但之后关于这两者的酶活真实性科学界一直存在争议,且后续没有SRC3蛋白本身以及关于其酶活的结构信息报道。我们想通过解析SRC3蛋白结构为SRC3的相关研究提供结构依据并为其是否具有乙酰化酶活提供结构信息。另外,解析SRC3的结构可以为开发针对SRC3的小分子抑制剂,用于今后SRC3相关癌症的临床治疗提供帮助。为了获得结构研究所需的大量SRC3蛋白,我们首先选择使用最简单、快速且成本较低的大肠杆菌系统进行不同的SRC3截短体蛋白的表达和分离纯化,但发现SRC3在大肠杆菌系统表达很低,即便我们进行了不同系列载体和不同标签的更换均没有成功获得大量高质量的重组蛋白。而后我们针对大肠杆菌的密码子对SRC3表达质粒进行了密码子序列优化,但是仍然没能有效提高SRC3的表达水平。考虑到SRC3在大肠杆菌的低表达可能是由于大肠杆菌缺乏SRC3蛋白稳定性所需的翻译后修饰,我们改用昆虫细胞系统表达SRC3,但发现昆虫表达的SRC3蛋白均是以不溶的包涵体的形式存在。我们也尝试了在哺乳动物293F细胞中表达SRC3蛋白,但发现分离纯化的SRC3蛋白易聚沉。由于在三个不同体系中单独表达SRC3蛋白均未获得理想的可溶蛋白,我们猜测SRC3可能需要与其它蛋白相互作用才能稳定存在。因此,我们先后尝试了已知的SRC3相互作用蛋白CRAM1以及p300,我们初步的实验结果表明CARM1和SRC3的相互作用较弱,CARM1与SRC3共表达不能有效促进SRC3的可溶性及纯化效果,但p300可以促进SRC3可溶性和稳定性。本论文的研究工作部分解释了为什么至今未有SRC3蛋白的晶体结构的报道,并为将来解析SRC3/p300晶体结构提供了有益的信息。