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目的研究沉默髓样细胞白血病-1(myeloid cell leukemia-1, Mcl-1)基因表达对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)诱导人胃腺癌耐阿霉素(adriamycin, ADR)细胞株SGC7901/ADR细胞凋亡的影响,探讨胃癌耐药细胞株耐TRAIL凋亡效应的可能机制。方法1.分别用终质量浓度为10、50和100 ng/mL TRAIL处理人胃腺癌耐药株SGC7901/ADR细胞48h,同时设置对照组(未经TRAIL处理的SGC7901/ADR细胞)和空白组(只有培养液没有细胞),采用MTT法检测各处理组细胞的活力,计算细胞生存率。2.分别用终质量浓度为10、50和100 ng/mL TRAIL处理SGC7901/ADR细胞24 h,同时设置对照组,采用Annexin V-FITC/PI细胞双染法对细胞进行染色并利用流式细胞仪检测各处理组细胞凋亡情况。3.分别采用real-time PCR法和Western bloting法检测不同浓度TRAIL(10、50、 100 ng/mL)作用SGC7901/ADR细胞48 h后Mcl-1 mRNA和蛋白表达变化。4.采用脂质体转染法,分别将Mcl-1-siRNA, NC-siRNA(negative control-siRNA)转染至SGC7901/ADR细胞中,同时设置空白对照组(只加Lipofectamine(?) 3000),48 h后,分别采用real-time PCR和Western bloting法检测SGC7901/ADR细胞中Mcl-1mRNA和蛋白表达水平,以鉴定基因沉默效果。5. Mcl-1-siRNA, NC-siRNA转染至SGC7901/ADR细胞后,再加入TRAIL (50 ng/mL)作用48 h,采用MTT法检测各处理组的细胞活力。6. Mcl-1-siRNA, NC-siRNA转染至SGC7901/ADR细胞后,再加入TRAIL (50 ng/mL)作用24 h,采用流式细胞术检测各处理组的细胞凋亡情况。7. Mcl-1-siRNA, NC-siRNA转染至SGC7901/ADR细胞后,加入TRAIL (50 ng/mL)作用48 h,Western bloting检测各处理组的activ-caspase 9, activ-caspase 3、Cyt C蛋白表达水平。结果1.与对照组比较,TRAIL可降低人胃腺癌耐药株SGC7901/ADR细胞生存率,但随着TRAIL浓度提高,细胞生存率下降程度不明显。2.流式细胞术检测结果显示,TRAIL可诱导SGC7901/ADR细胞凋亡,但增加TRAIL浓度时,细胞凋亡率增加不明显,50 ng/mLTRAIL组和100ng/mLTRAIL组间差异无统计学意义(P>0.05)。3. Real-time PCR和Western bloting结果显示,人胃腺癌耐药株SGC7901/ADR经TRAIL (10、50、100 ng/mL)作用48 h后,Mcl-1 mRNA和蛋白表达水平均上调。4. Mcl-1-siRNA转染后,SGC7901/ADR细胞中Mcl-1 mRNA和蛋白表达均明显下调。5.与TRAIL单独处理组相比,Mcl-1-siRNA转染与TRAIL联合作用组的SGC7901/ADR细胞的生存率明显降低。6.与TRAIL单独处理组相比,Mcl-1-siRNA抑制Mcl-1表达后可进一步增加TRAIL诱导的SGC7901/ADR细胞凋亡。7.与TRAIL单独处理组相比,Mcl-1-siRNA抑制Mcl-1表达后可进一步增加TRAIL引起的activ-caspase9,activ-caspase3、Cyt C蛋白表达上调。结论1.人胃腺癌耐药株对TRAIL诱导细胞凋亡的敏感性较低,且TRAIL可使SGC7901/ADR中Mcl-1 mRNA和蛋白表达上调。2.siRNA抑制Mcl-1表达可增强TRAIL对SGC7901/ADR细胞致凋亡作用,显示胃癌耐药细胞株SGC7901/ADR耐TRAIL致凋亡效应可能与Mcl-1高表达有关。