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本实验探讨了冷冻保护剂、冷冻方法、卵母细胞发育阶段、冻前预处理方法等因素对牛卵母细胞冷冻效果的影响，目的在于筛选适合超低温冷冻保存牛卵母细胞的冷冻程序。通过这一途径可望建立卵母细胞种子库，并为体外受精、卵核移植和体细胞克隆研究与应用提供实验材料。研究结果如下： (1)冷冻保护剂对牛卵母细胞毒性实验表明：四种冷冻保护剂：二甲基亚砜(DMSO)、丙二醇(PROH)、乙二醇(EG)、甘油(GL)在室温(25℃)和培养温度(39℃)条件下与牛GV期卵母细胞作用3min，脱保护剂后进行体外成熟培养。表明：四种冷冻保护剂在低浓度室温(25℃)条件下对牛GV期卵母细胞毒性弱，但随浓度增加毒性增强；39℃时毒性明显增加，其中EG毒性最弱。四种冷冻保护剂的毒性由强至弱是：GL＞PROH＞DMSO＞EG。分别添加1.5mol/L冷冻保护剂(DMSO、PROH、EG、GL)程序化冷冻牛GV期卵母细胞时，EG和PROH对牛GV期卵母细胞的保护比GL、DMSO效果要好一些。 (2)采用程序化冷冻法、细管玻璃化法(Straw)、开放式拉管法(OPS)、毛细玻管法(GMP)冷冻牛GV期卵母细胞，解冻经体外成熟、体外受精后观察2-细胞卵裂率表明：程序化冷冻和Straw玻璃化冷冻的卵裂率分别为3.33％和8.33％，二者差异不显著(P＞0.05)；OPS冷冻和GMP冷冻卵裂率分别为36.84％和36.67％，二者差异不显著(P＞0.05)，但OPS冷冻和GMP冷冻与程序化冷冻、Straw玻璃化冷冻的卵裂率相比差异极显著(P＜0.01)。结果表明：玻璃化冷冻效果优于程序化冷冻，GMP和OPS优于Straw玻璃化冷冻，GMP方法冷冻效果与OPS方法相近。 (3)采用GMP法冷冻GV期、体外培养6h、18h、22h各发育阶段的卵母细胞，解冻后再培养24h、18h、6h和2h，经体外受精分析卵裂率。冷冻后GV期卵母细胞的卵裂率为36.67％，培养6h和18h的卵裂率分别为40.98％和41.27％，三者之间无显著差异(P＞0.05)，但与培养22h卵母细胞(52.38％)和对照(68.42％)差异极显著(P＜0.01)。于如每一出冷冰际名的研究 搞一体外成熟（IVM）卵母细胞冷冻后卵裂率为 52．38O，与对照（68．42O）差异不显著 （P＞0刀5）。冷冻不同发育阶段的牛卵母细胞的结果表明：体外成熟培养22h的卵母细胞冷冻效果好于 GV期、培养 6h、18h的卵母细胞，越接近成熟的卵母细胞冷冻效果越好。 （4）在卵母细胞玻璃化之前，分别采用 1OEG、3％EG、6oEG、10OEG、l／2 VS溶液预处理卜！smin，比较玻璃化冷冻后卵母细胞的体外成熟率和卵裂率。结果表明采用3％的EG稀溶液预处理玻璃化前牛卵母细胞可分别获得较高的卵裂率36．96％。 研究表明，采用GMP玻璃化冷冻法来保存牛GV期卵母细胞是可行的。