稳定同位素技术在烧伤代谢领域中的应用研究

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目的:严重烧伤后,各种细胞因子、激素共同作用,机体内物质与能量代谢规律发生显著变化,蛋白代谢以高分解代谢和负氮平衡为特点。阐明高代谢状态下的机体代谢变化规律,实施完善的营养支持治疗措施,将明显改善此类患者的治疗效果及预后。目前,针对烧伤后的高代谢状态进行的研究多集中在病理生理机制与信号通路层面上,而针对如何量化烧伤后高代谢状态的研究较少。治疗方面,近年来国内外大量学者对谷氨酰胺的免疫营养作用进行了大量、广泛、深入的研究,不断揭示着它在维持人体正常生理代谢、病理生理代谢方面所起的重要作用,而针对谷氨酰胺的代谢动力学研究尚欠完善。稳定同位素示踪技术为代谢领域中重要的研究方法之一,在此基础上发展的双标稳定同位素技术使同时示踪两种甚至多种代谢物成为可能,而稳定同位素稀释技术更成为精确量化代谢产物的手段。本研究旨在应用稳定同位素技术,在建立稳定的严重烫伤大鼠模型的基础上,量化严重烫伤大鼠伤后总体蛋白代谢率;在外源性给予谷氨酰胺的前提下,量化严重烧伤患者体内谷氨酰胺的代谢效能。方法:1.精确烫伤面积动物模型的建立:雄性SD大鼠49只,体重(234.2±8.7)g,第一批取40只随机分为5组(n=8):6s组、8s组、10s组、12s组、14s组,分别将各组大鼠背部置于94℃热水接触6s、8s、10s、12s、14s,并于伤后24h采集烫伤皮肤标本比较各组大鼠烫伤创面深度、附件留存情况,持续饲养后比较创面愈合时间。第二批取9只大鼠为3D扫描组,背部94℃热水接触12s,伤后24h双目三维扫描大鼠背部烫伤皮肤面积,后解剖实体测量烫伤皮肤面积,将两者进行比较。2.烫伤大鼠总体蛋白代谢率的测定:采用上述烫伤动物模型,雄性SD大鼠20只,随机分为两组:假伤组(n=10)和烫伤组(n=10),伤后7d给予示踪氨基酸:2H标记的亮氨酸,给予示踪氨基酸后0.5h,由腹腔动脉取血液标本。将血清样本沉淀蛋白,分别进行亮氨酸衍生、KIC衍生、结合氨基酸处理,经过GC-MC检测,计算比较两组大鼠血浆游离氨基酸2H丰度、亮氨酸更新速率、整体蛋白质分解速率整体蛋白合成速率3.谷氨酰胺代谢效能研究:以稳定同位素氮15标记的谷氨酰胺(15N-Glutamine)稳定同位碳13标的谷氨酸(13C-Glutamic acid)作为踪剂,以重烧伤患者为究对象,以剂冲击与维持为踪氨酸输注方,以口服静脉7小时交叉途径,在血中踪氨酸稳态采标本,入内标13C-GlutamicacidM+5、13C-GlutamineM+5。衍生,GC-MC分析,量化谷氨酰胺代谢效能。:1.(1)第批5组大鼠烫伤创面深度差异有统学意义,随着烫伤时间增,烫伤深度成线深趋(p<0.05)。(2)第批5组大鼠烫伤创面愈时间差异有统学意义(F=167.3411,p=0.0000<0.05),随着烫伤时间增,烫伤创面愈时间成线延趋。(3)3D扫描组烫伤面积与剖量面积无统学差异(t=0.689,p=0.5008>0.05)。2.(1)烫伤组血游离氨酸2H丰度明显高于假伤组,烫伤组较假伤组增了48.24%,差异有统学意义(p<0.05)。(2)烫伤组亮氨酸更新为(236.2±13.1)μmol/(kg·h),假伤组为(132.2±6.5)μmol/(kg·h),烧伤组较对照组增了78.6%,差异有统学意义(p<0.05)。(3)烫伤组大鼠整体蛋白分为(9.1±1.6)g/kg·d,较假伤组(5.1±0.5)g/kg·d有明显增,前者较后者增高78.4%(p<0.05)。(4)烫伤组大鼠整体蛋白成为(5.1±1.8)g/kg·d,与假伤组(3.8±1.1)g/kg·d差异无统学意义(p=0.067﹥0.05)。(5)烫伤大鼠为平衡状态(-4.0±1.0)g/kg·d。3.(1)在以3.26mg/kg.h的标准维持胃肠予患者谷氨酸的情况下,胃肠吸的谷氨酸有有(1.35±0.28)%(n=12,曲线为态分)转化为体内的谷氨酰胺。(2)在以1.32mg/kg·h的标准维持静脉予患者谷氨酰胺的情况下,外源的谷氨酰胺的(81.4±8.1)%(n=12,曲线为态分)参与代谢被消。论:应用94℃热水大鼠背部12s可以建立稳定的深Ⅱ度~Ⅲ度烫伤大鼠动物模,3D扫描技能够精确算大鼠背部烫伤面积;在重烫伤大鼠模的础,烫伤4d后,大鼠总体蛋白分明显增高,超过假伤对照组50%以,而总体蛋白质成差异显;重烧伤患者,口服使用谷氨酸能够部分转化为血中的谷氨酰胺,比例较小,效能低,静脉使用谷氨酰胺时,会有部分谷氨酰胺直转化为谷氨酸,以谷氨酸的起营作用。
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