目的：子痫前期(preeclampsia)是妊娠妇女特有的疾病，发病率在我国为9.4％[1]，国外发病率为10％左右[2]，是导致孕产妇和围产儿死亡的主要原因。多年来发病原因不清，目前普遍认为与母胎免疫失衡[3]，滋养叶细胞受损，胎盘浅着床[4]，导致母体过度的炎症反应[5]及全身血管内皮损伤[6]有关。 穿孔素(perforin，PFN)与颗粒酶(granzym，Gzm)主要由成熟的NK(natural killer cell)和激活的CTL(cytotoxic T lymphocyte)细胞合成，存在于活化的CTL和NK细胞胞浆颗粒中[7，8]，穿孔素是由534个氨基酸残基组成的糖蛋白，有强溶细胞活性，分子量约60KD，蛋白结构和功能与溶细胞性补体蛋白C9相似，人类穿孔素基因定位于染色体10q22。它与颗粒酶、水解性溶酶体酶等共同组成的杀伤颗粒在CTL，NK细胞介导的细胞毒中起作用，是清除病毒感染靶细胞、肿瘤细胞、同种移植细胞的主要途径[1]。颗粒酶是一组同源性的丝氨酸蛋白酶，包括GzmA，B，K，H等成员，其中GzmB具有天门冬氨酸酶的活性，是主要效应分子，能迅速引起靶DNA断裂[10]。PFN和GzmB存在于活化的CTL和NK细胞胞浆颗粒中，是全身免疫重要的溶细胞效应分子，PFN和GzmB在子痫前期中变化，国外鲜有研究，国内尚未见报导。 本研究应用半定量RT-PCR方法及免疫组织化学方法，检测GzmB与PFN在正常孕妇和子痫前期外周血及胎盘中的表达情况，探讨其在子痫前期发病中作用。 方法：1.2007年12月—2009年2月在中国医科大学附属盛京医院产科住院分娩的子痫前期患者共30例(包括子痫前期重度患者19例，子痫前期轻度患者11例)，诊断和分类标准参照乐杰主编《妇产科学》(第6版)。选择同期正常妊娠孕产妇30例。各组孕妇均无原发性高血压、糖尿病、肝、肾疾病等，组间年龄、孕周、孕产次无显著性差异，具有可比性。2.采集各组孕妇空腹肘正中静脉血2ml，置入EDTA抗凝试管中，提取出外周血单个核细胞，—70℃深冻冰箱保存。胎盘娩出后立即在胎盘母体面中央切取胎盘组织约1cm*1cm*1cm，置入4％的多聚甲醛溶液中。3.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测子痫前期患者外周血GzmB与PFN的表达。提取外周血单个核细胞中总RNA，将mRNA逆转录成cDNA后行PCR反应，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，成像，分析，以β—actin同时扩增作内参照；用免疫组织化学法检测子痫前期疾病患者胎盘组织中GzmB与PFN蛋白的表达；标本固定，脱水，包埋，切片，石蜡切片常规脱蜡，水化，抗原热修复，3％H2O2溶液室温孵育10min，然后按照S-P试剂盒说明书进行实验。4.用SPSS16.0软件进行统计分析，半定量资料比较用卡方检验．定量资料用均数士标准差(X±s)表示，样本均数比较用t检验，P<0.05为有统计学意义。 结果：1.外周血中GzmB与PFN半定量RT-PCR方法检测结果。子痫前期患者外周血中GzmB的表达水平明显高于正常对照组，差异显著(P<0.05)，子痫前期患者外周血中PFN的表达水平高于正常对照组(P<0.05)，差异显著。两者在子痫前期轻度组与子痫前期重度组比较均无明显差异(P>0.05)。2.胎盘中GzmB与PFN免疫组织化学染色结果。GzmB与PFN的表达主要定位于胎盘蜕膜淋巴细胞及胎盘绒毛合体滋养细胞胞浆。子痫前期胎盘组织中GzmB蛋白表达明显高于正常对照组，差异显著(P<0.05)，子痫前期胎盘组织中PFN的表达水平明显高于正常对照组(P<0.05)，差异显著。两者在子痫前期轻度组与子痫前期重度组比较均无明显差异(P>0.05)。 结论：1、子痫前期患者外周血单个核细胞中GzmB与PFN水平表达增高，提示子痫前期发病可能与外周血单个核细胞中GzmB与PFN表达增强有关。2、子痫前期患者胎盘组织中GzmB与PFN蛋白表达组较正常孕妇增强，导致滋养叶细胞受损，胎盘浅着床，胎盘缺血缺氧，从而引发子痫前期的发病。