大熊猫是我国珍稀濒危动物,繁殖率低下制约着大熊猫种群数量与保育质量。大熊猫繁殖率低下可能与卵泡刺激素（Follicle-stimulating hormone,FSH）和黄体生成素（Luteinizing hormone,LH）等促性腺激素分泌不足有关。多年来我国使用异种外源促性腺激素诱导大熊猫发情及排卵,然而重复使用异种外源激素可能会诱使机体产生不良反应,进而影响其长期效果。为解决以上问题,本研究将制备大熊猫FSH和LH激素的重组蛋白,在细胞水平利用萤光素酶报告系统测定重组蛋白生物学活性。本论文主要结果如下:1.通过基因合成技术合成大熊猫FSHβ、LHβ和GTHα亚基的编码序列,利用T2A表达元件,构建了pc DNA3.1-FSHβ-T2A-GTHα和pc DNA3.1-LHβ-T2A-GTHα真核表达质粒等。随后,通过转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO）,利用免疫印迹（Western blot）技术,在CHO细胞和培养基中成功检测到大熊猫促性腺激素亚基蛋白（FSHβ、LHβ和GTHα）的表达。该结果表明:大熊猫FSH和LH蛋白可在CHO中表达,并分泌到胞外。2.利用RT-PCR技术从小鼠卵巢组织中扩增FSH受体（FSH receptor,FSHR）和LH受体（LH receptor,LHR）基因,并构建到pc DNA3.1（+）真核表达载体中。基于p GL3-CRE-luciferase萤光素酶报告系统,发现商业化重组人FSH和LH蛋白均可以激活表达于CHO细胞的小鼠FSHR和LHR,并刺激胞内c AMP-PKA信号通路。结果表明:表达小鼠FSHR和LHR的CHO细胞可以用于监测促性腺激素（FSH、LH）的生物学活性。3.采用建立的促性腺激素活性检测系统,本研究进一步检测了制备的大熊猫FSH和LH重组蛋白对表达于CHO细胞中的小鼠FSHR和LHR的激活效应。结果显示:含大熊猫FSH和LH蛋白的培养基,可以特异性和剂量依赖地激活小鼠FSHR和LHR。该结果表明:CHO细胞中表达的大熊猫FSH和LH不仅可以分泌至培养基中,还能进行糖基化修饰和装配成异二聚体蛋白,具有与天然FSH和LH相同的生物学活性。综上,本课题围绕大熊猫促性腺激素FSH和LH重组蛋白的制备开展研究,首次在CHO细胞中,获得具生物学活性的大熊猫FSH和LH重组蛋白。大熊猫FSH和LH重组蛋白的获得不仅为后续大量制备重组蛋白奠定基础,同时,也对采用该重组蛋白诱导大熊猫发情、排卵,解决大熊猫生殖障碍,提高大熊猫繁殖率和种群规模,具有积极意义。