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人胎盘源间充质干细胞(Human placenta-derived mesenchymal stem cells,h PDMSCS)是一种来源于胎盘组织且具有多向分化潜能的干细胞。有研究证实,在特定环境下它可以向成骨细胞诱导分化,因此可以作为骨组织工程的种子细胞,在骨组织改建尤其是组织工程骨构建中发挥重要作用。LIM矿化蛋白-1(LIM mineralization protein,LMP-1)是新近发现的一种重要骨形成调控因子,在成骨细胞分化、成熟及骨形成等多方面发挥重要调节作用。因此开发以h PDMSCS为种子细胞,以LMP-1为成骨诱导因子的组织工程骨具有一定的理论基础及临床前景。在构建组织工程骨之前,我们设想将外源性LMP-1转入h PDMSCS中,能否使目的基因LMP-1得以高效和持续表达,感染LMP-1的h PDMSCs的生物学性状及蛋白组学是否发生改变,为此我们进行了本研究。主要内容如下:1、h PDMSCs的分离、培养与鉴定我们从人废弃的胎盘组织样本中采集并分离、培养、扩增,获得h PDMSCS。通过流式细胞仪检测了其表面标志物,确定了阳性的抗原标记CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD117,但不表达CD33、CD34、CD45,这与国内外报导的h PDMSCS表面标志基本一致。成骨诱导分化表明,h PDMSCS有良好的成骨分化能力。成脂肪分化表明,h PDMSCS具备成脂肪分化能力。2、人LMP-1基因重组载体的构建及在胎盘源间充质干细胞的表达此步骤主要目的是构建人LMP-1基因重组载体,并使其在h PDMSCS中得到持续、高效表达。我们构建了重组腺病毒载体,并对其进行包装与扩增,转染h PDMSCS,通过RT-q PCR及Western Blot检测LMP-1基因在h PDMSCs的表达,再通过RT-q PCR t对不同实验组骨钙素和II型胶原蛋白基因的表达进行检测,发现LMP-1有助于促进h PDMSCs的成骨分化。3、蛋白质组学分析LMP-1对h PDMSCs分化影响的研究此步骤主要是采用比较蛋白质组学策略,旨在从蛋白质水平系统解析LMP-1促进成骨作用,以及对h PDMSCs分化成骨的全局影响。2-DE显示22种差异蛋白质,这22种差异蛋白质至少发生2倍的变化。通过质谱鉴定到了15种差异蛋白质,其中9种上调,6种下调。并对部分差异蛋白做了Western blot研究。本研究结果将有助于更好的阐明LMP-1诱导的h PDMSCS向成骨细胞分化的潜在分子机制,为后续构建以h PDMSCs为种子细胞、以LMP-1为成骨诱导因子的组织工程骨提供科学依据。