目的：通过临床和实验研究从脑肠轴结肠和海马两个层面探索调控腹泻型肠易激综合征内脏高敏感性的途径,并由此研究疏肝健脾法干预腹泻型肠易激综合征肝郁脾虚证的效应机制,通过“方药(四君子汤合四逆散方)→治法(疏肝健脾法)→病理机制(肝失疏泄导致脾失健运)→生理机能(肝主疏泄助脾胃运化)”的研究思路在一定程度上阐释肝主疏泄助脾胃运化的生物学基础,从而丰富腹泻型肠易激综合征发病机制和中医“肝主疏泄助脾胃运化”的生物学内涵。方法：一、临床研究采用随机对照双盲试验的设计进行。符合纳入标准的患者随机分为疏肝组、健脾组、疏肝健脾组和安慰剂组,并分别予以四逆散、四君子汤、四逆散合四君子汤和安慰剂治疗28±天。通过病例报告表采集治疗前后患者信息,ELISA法检测治疗前后患者血清脑肠肽,统计分析证候积分、腹痛评分、Bristol粪便性状评分、腹胀评分、血清5-羟色胺、P物质、神经肽Y的变化。二、实验研究运用4%醋酸灌肠复合慢性心理应激法制备腹泻型肠易激综合征肝郁脾虚证大鼠模型,并予疏肝健脾法进行干预。通过测量体重、旷场实验、糖水偏好实验、Bristol粪便性状评分、粪便含水率以及腹壁撤退反射评分等方法采集干预前后大鼠行为学表现；实验结束后ELISA法检测各组大鼠血清、结肠和海马组织5-羟色胺、P物质、神经肽Y等脑肠肽,运用实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测结肠和海马组织MAPK-ERK信号转导通路ERK1、ERK2和c-fos等指标,并按统计学要求分析相关指标。结果：一、临床研究(一)疏肝健脾法对腹泻型肠易激综合征肝郁脾虚证的干预作用1.年龄、病程和性别 四组患者年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05)；四组患者病程比较,差异无统计学意义(P>0.05)；四组患者性别构成比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2.证候积分疏肝健脾组治疗前后证候积分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。安慰剂组治疗前后证候积分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。疏肝健脾组和安慰剂组治疗后证候积分差值的比较,差异有统计学意义(P<0.05)。3.腹痛评分疏肝健脾组治疗前后腹痛评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。安慰剂组治疗前后腹痛评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。疏肝健脾组和安慰剂组治疗后腹痛评分差值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。4. Bristol粪便性状评分疏肝健脾组治疗前后Bristol粪便性状评分比较,差异有统计学意义(P<.05)。安慰剂组治疗前后Bristol粪便性状评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。疏肝健脾组和安慰剂组治疗后Bristol粪便性状评分差值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。5.腹胀评分疏肝健脾组治疗前后腹胀评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。安慰剂组治疗前后腹胀评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。疏肝健脾组和安慰剂组治疗后腹胀评分差值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(二)疏肝健脾法对腹泻型肠易激综合征肝郁脾虚证患者血清脑肠肽的干预作用1.5-羟色胺疏肝健脾组治疗前后血清5-HT比较,差异有统计学意义(P<0.05)。安慰剂组治疗前后血清5-HT比较,差异无统计学意义(P>0.05)。疏肝健脾组和安慰剂组治疗后血清5-HT差值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2.P物质 疏肝健脾组治疗前后血清SP比较,差异有统计学意义(P<0.05)。安慰剂组治疗前后血清SP比较,差异无统计学意义(P>0.05)。疏肝健脾组和安慰剂组治疗后血清SP差值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。3.神经肽Y疏肝健脾组治疗前后血清NPY比较,差异有统计学意义(P<0.05)。安慰剂组治疗前后血清NPY比较,差异无统计学意义(P>0.05)。疏肝健脾组和安慰剂组治疗后血清NPY差值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。,(三)四组有效率比较疏肝健脾组有效率为90%,疏肝组有效率为83.33%,健脾组有效率为76.67%,安慰剂组有效率为70%。治疗后四组有疗效比较,差异无统计学意义(P>0.05)。二、实验研究(一)疏肝健脾法对腹泻型肠易激综合征肝郁脾虚证大鼠行为学的影响1.一般情况造模后正常对照组大鼠活跃,鼠毛整洁有光泽,未观察到大鼠舔舐腹部和弓背抬腹现象,无肛周污迹,无稀溏或粘液样大便,垫料干燥无明显臭味,鼠笼清洁。模型组大鼠活跃度低、鼠毛缺乏光泽并可见少许粪便附着,可见大鼠舔舐腹部和弓背抬腹现象,肛周污迹显著,粪便稀溏或伴有黏液,垫料臭味明显,鼠笼清洁度差。疏肝健脾组大鼠表现活跃,鼠毛整洁有光泽,未观察到大鼠舔舐腹部和弓背抬腹现象,未观察到肛周污迹和稀溏样大便,垫料干燥无明显臭味,鼠笼清洁。2.体重空白组和模型组治疗前后大鼠体重差值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗前后大鼠体重差值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝组治疗前后大鼠体重差值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗前后大鼠体重差值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。3.糖水偏好实验 空白组和模型组治疗后大鼠糖水偏爱百分比比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠糖水偏爱百分比比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠糖水偏爱百分比比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠糖水偏爱百分比比较,差异有统计学意义(P<0.05)。4.旷场实验空白组和模型组治疗后大鼠旷场总路程比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠旷场总路程比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠旷场总路程比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠旷场总路程比较,差异有统计学意义(P<0.05)。5.粪便含水率空白组和模型组治疗后大鼠粪便含水率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠粪便含水率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠粪便含水率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠粪便含水率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。6.Bristol大便评分空白组和模型组治疗后大鼠Bristol粪便评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠Bristol粪便评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠Bristol粪便评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠Bristol粪便评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。7.腹壁撤退反射(AWR)评分20mmHg球囊压力下的AWR：五组治疗后20mmHg球囊压力下AWR评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。40mmHg球囊压力下的AWR：空白组和模型组治疗后大鼠AWR评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠AWR评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠AWR评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠AWR评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。 60mmHg球囊压力下的AWR：空白组和模型组治疗后大鼠AWR评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠AWR评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠AWR评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠AWR评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。80mmHg球囊压力下的AWR： 空白组和模型组治疗后大鼠AWR评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠AWR评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠AWR评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠AWR评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(二)疏肝健脾法对腹泻型肠易激综合征肝郁脾虚证大鼠外周敏化的作用1.血清脑肠肽(1)大鼠血清5-HT空白组和模型组治疗后大鼠血清5-HT比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠血清5-HT比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠血清5-HT比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠血清5-HT比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)大鼠血清SP空白组和模型组治疗后大鼠血清SP比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠血清SP比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠血清SP比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠血清SP比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)大鼠血清NPY空白组和模型组治疗后大鼠血清NPY比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠血清NPY比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠血清NPY比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠血清NPY比较,差异有统计学意义(P<.05)。2.结肠脑肠肽(1)大鼠结肠5-HT空白组和模型组治疗后大鼠结肠5-HT比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠结肠5-HT比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠结肠5-HT比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠结肠5-HT比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)大鼠结肠SP空白组和模型组治疗后大鼠结肠SP比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠结肠SP比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠结肠SP比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠结肠SP比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)大鼠结肠NPY空白组和模型组治疗后大鼠结肠NPY比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠结肠NPY比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠结肠NPY比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠结肠NPY比较,差异有统计学意义(P<0.05)。3.结肠MAPK-ERK信号转导通路(1)结肠ERK1 ERK1 mRNA:空白组和模型组治疗后大鼠结肠ERK1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠结肠ERK1 mRNA表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠结肠ERK1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠结肠ERK1mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ERK1蛋白：空白组和模型组治疗后大鼠结肠ERK1蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠结肠ERK1蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠结肠ERK1蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠结肠ERK1蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)结肠ERK2 ERK2 mRNA:空白组和模型组治疗后大鼠结肠ERK2 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠结肠ERK2 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠结肠ERK2 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠结肠ERK2mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ERK2蛋白：空白组和模型组治疗后大鼠结肠ERK2蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠结肠ERK2蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠结肠ERK2蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠结肠ERK2蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)结肠c-fos c-fos mRNA:空白组和模型组治疗后大鼠结肠c-fos mRNA表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠结肠c-fos mRNA表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠结肠c-fosmRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠结肠c-fos mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。c-fos蛋白：空白组和模型组治疗后大鼠结肠c-fos蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠结肠c-fos蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠结肠c-fos蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠结肠c-fos蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(三)疏肝健脾法对腹泻型肠易激综合征肝郁脾虚证大鼠中枢敏化的影响1.海马脑肠肽(1)海马5-HT空白组和模型组治疗后大鼠海马组织5-HT含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠海马组织5-HT含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠海马组织5-HT含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠海马组织5-HT含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)海马SP空白组和模型组治疗后大鼠海马组织SP含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠海马组织SP含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠海马组织SP含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠海马组织SP含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)海马NPY空白组和模型组治疗后大鼠海马组织NPY含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠海马组织NPY含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠海马组织NPY含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠海马组织NPY含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。2.海马MAPK-ERK信号转导通路(1)海马ERK1 ERK1 mRNA:空白组和模型组治疗后大鼠海马组织ERK1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠海马组织ERK1mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠海马组织ERK1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠海马组织ERK1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ERK1蛋白：空白组和模型组治疗后大鼠海马ERK1蛋白表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠海马ERK1蛋白表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠海马ERK1蛋白表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠海马ERK1蛋白表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)海马ERK2 ERK2 mRNA:空白组和模型组治疗后大鼠海马组织ERK2 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠海马组织ERK2mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠海马组织ERK2 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠海马组织ERK2 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ERK2蛋白：空白组和模型组治疗后大鼠海马ERK2蛋白表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠海马ERK2蛋白表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠海马ERK2蛋白表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠海马ERK2蛋白表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)海马c-fos c-fos mRNA:空白组和模型组治疗后大鼠海马组织c-fos mRNA表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠海马组织c-fos mRNA表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠海马组织c-fos mRNA表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠海马组织c-fos mRNA表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。c-fos蛋白：空白组和模型组治疗后大鼠海马组织c-fos蛋白表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和健脾组治疗后大鼠海马组织c-fos蛋白表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝组治疗后大鼠海马组织c-fos蛋白表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和疏肝健脾组治疗后大鼠海马组织c-fos蛋白表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：(一)4%醋酸灌肠复合慢性心理应激法造模可导致5-HT、SP和NPY等在脑肠轴异常表达,并激活结肠和海马组织MAPK-ERK信号转导通路,使c-fos转录因子的表达异常升高,进而产生腹泻型肠易激综合征的内脏高敏感性。(二)疏肝健脾法治疗腹泻型肠易激综合征的效应机制与调节异常水平5-HT、SP和NPY等脑肠肽介导的MAPK-ERK信号转导通路变化,下调c-fos表达,从而改善外周敏化和中枢敏化有关。(三)腹泻型肠易激综合征肝郁脾虚这一核心病机在分子层面的体现是：异常水平脑肠肽引起结肠和海马的MAPK-ERK信号转导通路的过度激活。(四)“肝主疏泄助脾胃运化”的生物学内涵与脑肠肽及其受体介导的信号转导通路对脑肠轴中枢和外周的调控相关。创新点：(一)丰富了腹泻型肠易激综合征的发病机制,认为MAPK-ERK信号转导通路的异常变化是引起腹泻型肠易激综合征内脏高敏感性的重要途径,并由此入手,发现疏肝健脾法治疗腹泻型肠易激综合征的效应机制是调控异常水平脑肠肽引起的MAPK-ERK信号通路变化,降低c-fos的表达,从而改善内脏高敏感性。(二)认为腹泻型肠易激综合征肝郁脾虚这一核心病机的在分子层面的体现与激活脑肠轴外周和中枢的MAPK-ERK信号转导通路有关,并由病理反推生理,阐释了“肝主疏泄助脾胃运化”的生物学内涵。(三)以脑肠轴为框架,比较了疏肝法、健脾法和疏肝健脾法在结肠和海马层面干预腹泻型肠易激综合征分子机制的异同,为“同病异治”的研究做了有益探索。