免疫逃逸是肿瘤免疫治疗的主要障碍,如果将肿瘤细胞变成炎症细胞,可以在一定程度上克服肿瘤的免疫逃逸机制。近年来,一系列的研究表明,在肿瘤的微环境诱导炎症反应,可以增强免疫细胞对肿瘤细胞的识别。肿瘤微环境炎症反应的诱导可通过放射、高频消融、注射细菌产物或者直接注射厌氧菌。早在300多年前,研究者就已经观察到感染了细菌的实体瘤患者肿瘤被抑制,甚至消退。近年来,一些厌氧菌如,双歧杆菌,芽孢杆菌,及兼性厌氧菌,如沙门氏菌均具有肿瘤的靶向性,已经用于小鼠肿瘤的免疫治疗。但这些细菌对小鼠及人有较强的毒副作用,目前很难在临床上应用。E. coli Top10是一类非致病性的兼性厌氧菌,安全性较高。同时,E. coli Top10是一种实验室常用的工程菌,目前研究广泛、遗传背景较清楚,很利于基因工程操作。本研究,我们首先建立了C57BL/6小鼠黑色素瘤模型,然后尾静脉注射E. coli Top10通过组织匀浆细菌培养的定量方法检测细菌在肿瘤组织和正常组织中的生长情况。从假结核耶尔森菌的基因组中克隆了侵染素基因,通过氨卞抗生素抗性基因的启动子控制侵染素基因inv的表达。通过庆大霉素保护性实验分析E. coli Top10对人宫颈癌细胞的侵染性。结果表明,通过尾静脉感染的C57BL/6荷瘤小鼠肿瘤组织和肝脏组织中E. coli Top10的比例第4天约为137:1,第6天约为530:1。庆大霉素保护性实验表明,构建的重组E. coli Top10对肿瘤细胞的侵染性为0.4%。本研究初步说明E. coli Top10对黑色素瘤具有较好的靶向性,转化有侵染素基因的重组菌E.coli Top10可以进入到哺乳动物细胞中去。