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[研究目的]本研究旨在明确熊果酸对非小细胞肺癌A549、H1299细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,并在此基础上探讨熊果酸对Wnt/β-catenin信号通路的影响,从而进一步揭示熊果酸抗NSCLC增殖、迁移和侵袭的分子机制,以期为后续探讨熊果酸抗NSCLC提供新的研究思路和方向,也为临床寻找NSCLC的新靶点提供实验依据。[研究方法]本研究拟采用两种人肺腺癌A549、H1299细胞体外模型。第一部分通过CCK8实验、克隆形成实验观察熊果酸对A549、H1299两种细胞株增殖作用,检测细胞相对抑制率;并通过Transwell小室侵袭实验和划痕愈合实验,分别观察熊果酸对A549、H1299细胞体外迁移、侵袭水平的影响。第二部分采用Western blot技术检测不同剂量组中Wnt/β-catenin信号通路中核心蛋白 β-catenin、p-β-catenin 以及通路中上下游GSK3β、Axin、cyclin-D1、c-Myc等蛋白的表达情况。此外,还提取细胞核蛋白,观察核内β-catenin蛋白表达情况,并运用免疫荧光实验观察熊果酸对β-catenin入核的影响。第三部分拟通过慢病毒感染技术过表达Wnt通路的核心蛋白β-catenin,在此基础上设立阴性病毒对照组、β-catenin过表达组和过表达加药组,观察过表达后各组体外增殖、迁移和侵袭水平的改变情况,并通过Western blot实验观察Wnt通路相关分子的蛋白水平的表达情况。[研究结果]第一部分结果:熊果酸呈浓度-时间依赖性抑制A549和H1299细胞的增殖,24h的IC50分别为24.53±0.39μM和27.12±0.89 μM。根据CCK-8结果,选取10、20、30μM作为后续实验的作用浓度分组,作用时间为24h。克隆形成实验、划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验结果表明,与未加药的对照组相比,熊果酸均能呈浓度依赖性抑制A549和H1299细胞的克隆形成数、迁移距离和穿过Transwell小室的细胞数,提示熊果酸对NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力具有一定的抑制作用。第二部分结果:Western blot实验结果显示熊果酸可以上调Wnt/β-catenin信号通路中GSK3β、Axin1的表达并下调通路下游cyclin-D1、c-Myc的表达;进一步提取细胞总蛋白和细胞核蛋白,发现熊果酸可以抑制β-catenin在细胞质和细胞核内的表达,免疫荧光实验发现熊果酸对β-catenin的入核运动有抑制作用,这都提示熊果酸可以通过调控β-catenin入核运动而抑制Wnt/β-catenin通路活性。第三部分结果:慢病毒过表达β-catenin后,同时设立阴性病毒对照组、过表达组和过表达加药组,发现熊果酸可回复性的抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制Wnt/β-catenin通路下游靶基因cyclin-D1、c-Myc的表达。[结论]1.熊果酸呈浓度依赖性的抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭;2.熊果酸通过介导β-catenin核转移抑制Wnt/β-catenin通路活性;3.熊果酸通过抑制Wnt/β-catenin通路的β-catenin核转移而抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭。