SOX4在口腔扁平苔藓相关口腔鳞状细胞癌中的表达验证及其意义

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目的:1.采用液相色谱-串联质谱(Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry, LC-MS/MS)技术筛选可能引起口腔扁平苔藓(Oral Lichen Planus, OLP)癌变的相关高风险分子标志物SOX4。2.从蛋白水平检测SOX4在口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma, OSCC)细胞株及正常人口腔角质上皮(Normal Human Oral Keratinocyte, NHOK)细胞株中的表达情况。3.利用免疫组化技术进一步检测SOX4在OLP、OSCC及口腔扁平苔藓相关鳞状细胞癌(Oral Lichen Planus Related Oral Squamous Cell Carcinoma, OLP-OSCC)组织中的表达变化。方法:1.实验中所用的福尔马林固定石蜡包埋(Formalin-Fixed and Parrf fin-Embedded, FFPE)组织标本为2004年-2013年间在四川省医学科学院·四川省人民医院口腔科就诊的单纯OSCC(非OLP相关的OSCC)患者标本27例,单纯OLP患者标本19例,OLP-OSCC患者标本5例,、均由四川省医学科学院·四川省人民医院病理科提供,采用LC-MS/MS技术检测各组标本,分离肽段,鉴定蛋白质,获得差异蛋白SOX4;2.进一步利用western blotting蛋白免疫印记技术检测SOX4蛋白在NHOK细胞株和OSCC细胞株中的表达变化;3.对19例OLP患者标本,27例OSCC患者标本,5例OLP-OSCC患者标本进行免疫组化检测,检测3组标本中SOX4的表达情况。结果:1.利用LC-MS/MS技术在OLP的FFPE标本中一共鉴定出97种蛋白,在OSCC的FFPE标本中鉴定出135种蛋白,在OLP-OSCC的FFPE标本中鉴定出142种蛋白,并筛选出差异蛋白SOX4,发现SOX4蛋白仅在OLP-OSCC组织中表达;2.western blotting结果显示SOX4在NHOK细胞株中基本不表达,在OSCC细胞株中高表达;3.免疫组化结果显示SOX4在oscc和OLP-OSCC组织的细胞核内均呈强阳性表达,且表达阳性率分别是96.29%及100%,SOX4在OLP组织中基本不表达,阳性率为5.26%。结论:1.本实验成功地利用LC-MS/MS技术从OLP、OSCC和OLP-OSCC的FFPE标本中获得并鉴定出差异蛋白,筛选出关键差异蛋白SOX4;2.在蛋白水平对SOX4的表达进行验证,发现SOX4在OSCC细胞及组织中高表达;3.SOX4蛋白可能作为OSCC的一种新风险标志物,参与OLP恶变为OSCC的过程。
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