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研究背景:原发性肝癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,其最常见的病理类型是肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)。全球每年HCC新发病例数为74.8万[1-2],肿瘤相关性死亡高居第3位[3],其中我国HCC发病率和死亡率都高居世界前列。HCC起病隐袭,早期诊断困难,多数病例在确诊时已为晚期失去根治性切除的机会,而且手术切除后患者经常出现复发和转移,高复发率也是影响肝癌患者生存的主要原因。目前临床常用的肝癌预后预测指标包括AFP、肿瘤大小、血管浸润、病理分级等,但仍缺乏被公认的肝癌预后预测分子标志物。因此,积极寻找有价值的分子标志物对于肝癌的早期诊断和预后判断具有重要意义。RacGTP酶激活蛋白1(RacGTPase-activating protein 1,RACGAP1)是一种进化上保守地作用于RhoGTP酶家族的GTP酶激活蛋白,属于GTP酶激活蛋白家族。RACGAP1已被证明在多种恶性肿瘤细胞中高表达,且其在多种恶性肿瘤中的高表达已被证明与多种临床病理参数及患者预后不良显著相关。但目前RACGAP1在HCC中的表达及预后关系的相关文献报道仍很少。【目的】本课题以HCC为研究对象,选择RACGAP1蛋白分子,检测其在HCC中的表达水平并分析其与临床病理参数之间的关系,探讨它在HCC发生发展中的作用及预后价值。【方法】(1)本课题收集蚌埠医学院第一附属医院2008年1月至2012年12月经手术切除的肝细胞癌病人临床信息和病理标本,93例有完整病历资料、病理分级,其中78例有随访资料,所有病例信息均通过门诊、住院复查及电话随访并记录。收集肝炎穿刺标本30例,肝硬化穿刺标本39例。使用外伤性肝切除或意外死亡的成人正常肝脏标本18例作为正常对照。(2)应用免疫组织化学技术检测HCC 93例、肝硬化39例、肝炎30例、正常肝组织18例中RACGAP1蛋白的表达及定位。(3)应用蛋白质印迹(Western blot)技术检测10例新鲜冰冻肝癌组织及10例新鲜正常肝组织中RACGAP1蛋白的表达差异。(4)分析RACGAP1蛋白表达情况与临床病理参数之间的关系,分析探讨其在HCC中高表达对预后的影响。(5)统计方法:数据统计分析采用Microsoft Office Excel 2007(Microsoft;Redmond,WA,USA)和SPSS17.0版(SPSS,Inc;Chicago,IL,USA)软件。各组免疫组化计数资料间采用四格表χ2检验或Fisher精确概率法检验差异是否具有统计学意义。Western blot计量资料采用单样本t检验。使用Kaplan-Meier方法对总生存率进行评估,RACGAP1表达与HCC患者的临床病理参数的相关性采用卡方检验进行评价,同时采用Kaplan-Meier方法和Log-rank检验对RACGAP1表达、临床病理特征与临床预后的相关性进行检验。对于影响HCC患者总生存率的因素采用Cox回归分析进行识别。P<0.05认为差异具有统计学意义。【结果】(1)在正常肝组织、肝炎及肝硬化组织中RACGAP1免疫组化结果均为阴性表达;93例肝癌组织中RACGAP1蛋白表达率分别为44.1%(41/93),组间差异有统计学意义(P<0.05)。在肝癌组织中,RACGAP1阳性颗粒多位于细胞浆,部分有胞核和胞浆的共表达。(2)应用Western Blot方法检测10例新鲜冰冻肝癌组织及10例正常肝组织中RACGAP1蛋白表达,结果提示有3例(3/10)肝癌标本中RACGAP1蛋白含量明显高于作为对照的正常肝组织。(3)RACGAP1蛋白表达与HCC肿瘤大小、病理分级、TNM分期、脉管癌栓以及淋巴结转移等临床病理参数均有统计学差异(均P<0.05),但与患者的性别和年龄无关(P>0.05)。进一步对生存资料行单因素分析发现,RACGAP1蛋白表达阳性、有血管侵犯、TNM分期晚的患者生存率显著降低;Cox模型多因素分析发现,RACGAP1蛋白高表达是HCC患者具有统计学意义的独立预后因素。【结论】RACGAP1蛋白的异常高表达及其在胞质和胞核的异常定位,且其高表达与多项临床病理参数及预后相关,提示其在HCC的发生发展过程中起到重要作用,RACGAP1有可能成为HCC的恶性生物学行为及不良预后的分子标志物。