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宫颈癌是目前最常见的妇科恶性肿瘤,其发病率和死亡率均位于我国女性肿瘤疾病的第二位,且疾病发生逐渐呈现年轻化的趋势。人乳头瘤病毒(HPV)是一种已被证实在子宫颈形成增生性病变的病毒,已有大约180种的人乳头瘤病毒基因型被确定,其中被认定为高危型-HPV(HR-HPV)基因型至少有15种,即16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82。约90%的女性在感染病毒后3年内自发地清除病毒,而约10%的女性会持续感染,约1%的女性会发展为宫颈癌。因此,HPV持续感染是宫颈上皮内瘤变(CIN)恶性进展的关键,而吸烟、多产、长期摄入口服避孕药和免疫功能低下被认为是人乳头瘤病毒持续感染和致癌过程共同的风险因素。目前认为,宿主免疫监视功能是控制自身肿瘤形成的重要因素,而肿瘤本身可进一步导致机体免疫系统异常。高危型HPV病毒(HR-HPV)在机体免疫系统异常的情况下持续感染,通过各种方式逃逸宿主的免疫识别,使宿主不能有效激活和启动细胞免疫应答和体液免疫应答,使得患者从CIN进展到宫颈癌。在正常机体内,发挥细胞免疫主体作用的淋巴细胞在数量上与其他免疫细胞之间保持着一定的比例,对CIN患者外周血淋巴细胞亚群进行绝对计数和相对计数,可以反映患者的免疫情况。鉴此,本研究拟通过HPV基因分型联合宫颈细胞学检查,首先探讨HPV基因分型与CIN进展的关系,进而分析不同分级和不同HPV基因分型CIN患者外周血T淋巴细胞亚群表达分布特征,以期阐述感染HPV的CIN患者免疫应答的特点,分析CIN患者的整体免疫状态与HPV感染基因分型的关系,有利于研究HPV感染和CIN患者的免疫治疗策略,对HPV病毒感染治疗、预后及预防性疫苗和治疗性疫苗临床前期应用与疗效评估具有重要意义。第一部分 CIN患者HPV感染基因型分布特点初步分析目的:分析不同分级CIN患者HPV感染基因型分布特点。方法:通过宫颈液基细胞学检查,对宫颈病变者取活检标本进行CIN分级,PCR-反向点杂交法对患者宫颈脱落细胞进行HPV基因分型检测。数据处理采用SPSS26软件,计数资料采用卡方检验,P<0.05具有统计学意义。结果:CIN患者HPV感染率比正常宫颈组织高,以HR-HPV感染为主,宫颈病变(CIN I及以上病变)组HR-HPV感染率为77.0%,其中HPV16、HPV58、HPV33、HPV52和HPV18是最常见的高危基因型。进一步分析HR-HPV基因型在不同CIN患者中的分布,结果表明,HPV16、HPV58/52/33、HPV16/18混合基因型感染率在CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ三组有差异,组间差异有统计学意义,这也提示了HPV16、HPV58/52/33、HPV16/18混合基因型感染更易导致CINⅡ及以上病变发生。结论:HR-HPV感染是CIN患者一个重要的危险因素,其中HPV16、HPV58/52/33、HPV16/18混合基因型感染更易导致CINⅡ及以上病变发生。第二部分 CIN患者外周血T淋巴细胞亚群表达特征的初步分析目的:检测不同分级和不同HPV基因分型CIN患者外周血CD4+、CD4+CD45RO+、CD8+、CD8+CD38+T淋巴细胞绝对计数和相对计数,以分析不同分级CIN患者外周血T淋巴细胞免疫表型的特征。方法:经免疫荧光标记和流式细胞术分析,进行外周血CD4+、CD4+CD45RO+、CD8+、CD8+CD38+T淋巴细胞亚群绝对计数和相对计数。数据处理采用SPSS26软件,计量数据以均数±标准差表示,组间差异显著性分析采用Students T-test或单因素方差分析,计数资料的差异性分析可采用卡方检验,P<0.05具有统计学意义。结果:与健康对照组比,不同分级CIN患者,主要是CINⅡ、CIN Ⅲ级患者外周血相对计数CD4/CD8比值下降,分别为1.09±0.30、0.99±0.26,差异有统计学意义(P<0.05)。在HR-HPV感染组CIN患者CD4+T细胞、CD8+T细胞绝对计数分别为481±133个/UL和375±102个/UL,显著低于HPV低危型感染或HPV阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。在HR-HPV混合基因型感染组,CIN患者CD8+CD38+T细胞绝对计数207±56个/UL,显著高于HR-HPV单一基因型感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CIN患者局部宫颈HPV感染伴随外周血T细胞表型改变,HPV基因分型联合流式细胞术检测CD4/CD8相对计数比值、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD8+CD38+T细胞亚群绝对计数对CIN患者免疫功能评估及治疗效果和预后具有一定参考价值。